[發明專利]一種激活NK樣細胞的工程化細胞及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011522131.8
• 申請日: 2020-12-21
• 公開（公告）號: CN112626028A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 湯朝陽;秦樂;吳迪;馮世忠;馮嘉昆;楊樂旋;其他發明人請求不公開姓名
• 申請（專利權）人: 廣東昭泰體內生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;C12N7/01;C12N13/00;A61K35/17;A61P35/00;C12R1/93
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明提供了一種激活NK樣細胞的工程化細胞及其制備方法和應用，所述工程化細胞為表達膜蛋白MICA、IL?21、CD64和CD86的哺乳動物細胞。本發明的工程化細胞表達活化NK樣細胞的膜蛋白，提高了NK樣細胞的擴增能力和腫瘤細胞毒性，提供了一種標準化體外擴增NK樣細胞的策略。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，涉及一種激活NK樣細胞的工程化細胞及其制備方法和應用。

背景技術

NK樣細胞為利用CRISPR/Cas9技術對T細胞進行重編程而獲得的細胞，NK樣細胞具有T細胞和NK細胞的雙重功能，不依賴于主要組織相容性復合體(MHC)，相較于T細胞或NK細胞具有顯著提高的腫瘤殺傷功能，在癌癥治療中展現出了巨大的潛力。

將NK樣細胞應用于免疫治療的一大障礙是難以生產大量功能完全的NK樣細胞，同時缺少體外擴增NK樣細胞的標準方法。目前常用的NK細胞的培養方法包括血液細胞分離法、細胞因子或化學藥品刺激法和飼養細胞法，但是這些方法普遍存在著操作繁瑣、成本高、周期長、數量無法滿足需求的問題，且不十分適用于NK樣細胞的培養。

近年來，使用基因工程技術構建的人工抗原呈遞細胞(滋養層細胞)越來越多地應用于NK細胞的體外擴增。但是NK樣細胞不同于NK細胞，其具有T細胞和NK細胞雙重功能，目前尚無有效的體外擴增和活化NK樣細胞的方法。

發明內容

針對現有技術的不足和實際需求，本發明提供了一種激活NK樣細胞的工程化細胞及其制備方法和應用，所述工程化細胞表面表達有活化NK樣細胞的膜蛋白，通過與NK樣細胞受體結合，實現了激活NK樣細胞的效果。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供了一種激活NK樣細胞的工程化細胞，所述工程化細胞為表達膜蛋白MICA、IL-21、CD64和CD86的哺乳動物細胞。

本發明中，將MICA、IL-12、CD64和CD86表達于哺乳動物細胞表面構建激活NK樣細胞的工程化細胞，通過與NK樣細胞表面的受體結合用于活化NK樣細胞，顯著提高了NK樣細胞的擴增數量和腫瘤細胞毒性。

優選地，所述MICA包括SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；

SEQ ID NO:1：

MGLGPVFLLLAGIFPFAPPGAAAEPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLTEVHLDGQPFLRCDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRMTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETKEWTMPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLKSGVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASGFYPWNITLSWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICQGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHWQTFHVSAVAAAAIFVIIIFYVRCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTSDHRDATQLGFQPLMSDLGSTGSTEGA。

優選地，所述IL-12通過與CD28跨膜區形成融合蛋白、表達在所述工程化細胞表面。

優選地，所述IL-12包括如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；

SEQ ID NO:2：