[發明專利]一種雌二醇和雌酮的檢測方法

有效

• 申請號: 202011520613.X
• 申請日: 2020-12-21
• 公開（公告）號: CN112557568B
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發明（設計）人: 蔡國杰;陳秀如;佘旭輝;趙蓓蓓;韋蘭清;董衡;曾釗杰;程雅婷
• 申請（專利權）人: 廣州金域醫學檢驗集團股份有限公司;廣州金域醫學檢驗中心有限公司;金域檢驗（香港）有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 廣州廣典知識產權代理事務所(普通合伙) 44365
• 代理人: 萬志香

本發明涉及一種雌二醇和雌酮的檢測方法。本發明方法包括以下步驟：樣本處理：取血清待測樣品，加入內標D5?雌二醇和¹³C3?雌酮的乙腈水溶液，再加入萃取劑，離心，取上清液與堿水溶液混合，離心，取上清液濃縮、復溶，離心，取上清液進行液相色譜質譜法測定。本發明方法步驟簡單操作方便，無需衍生化，取樣量少，檢測限低，樣品前處理除雜效果佳，可滿足臨床各類人群的檢測需求，特別是適用于極低濃度雌二醇和雌酮檢測需求的人群。

技術領域

本發明涉及分析領域，特別是涉及一種雌二醇和雌酮的檢測方法。

背景技術

雌激素是一種具有廣泛生物活性的類固醇激素，主要以17β-雌二醇(E2)、雌酮(E1)、雌三醇(E3)等形式存在，他們與雌激素受體(ERs)結合后可產生多種生理作用。E2是最具生物活性的雌激素，它是E1生物學效力的1.25-5倍，E3主要與妊娠相關，效力最弱。

雌激素在人體的生理作用主要有：輔助診斷青春期前的兒童和青少年卵巢功能缺陷，性腺發育不全，性腺功能減退癥、性早熟和青春期前男子女性型乳房，也可用于鑒別診斷兒童中樞性性早熟；評估成年女性生殖功能，以輔助生殖；評估絕經期女性及老年男性因雌激素缺乏導致的骨折風險；以及用于雌激素或抗雌激素治療藥物的療效監測等。

臨床上雌二醇生理水平分布極寬，可以達到四個數量級，針對不同的人群，體內含量差異非常大，大部分人群的雌激素含量水平較低，特別是兒童、絕經期女性、男性、性發育延遲的青少年、服用芳香酶抑制劑治療乳腺癌的女性等特殊人群，雌激素的水平更低，需要測量低至1pg/mL的濃度水平，而在進行體外受精計劃的女性中，雌二醇的準確測量用于監測排卵誘導和卵巢過度刺激，則需要在大約3000pg/mL的水平上進行可靠的測量。

目前主要采用免疫法進行人體內雌激素(雌酮、雌二醇)的測定，受不同的內源性化合物的干擾(具有相似結構的雌激素異構體等)，免疫檢測法無法區分且容易產生交叉反應，外源性雌激素(如共軛雌激素、營養補充劑等)也會干擾檢測結果，導致結果的高估，同時，大多數直接免疫法只能檢測低至30pg/mL的濃度水平，遠遠不能滿足兒童、絕經期女性、男性、使用芳香酶抑制劑治療的女性的測量需求，而間接免疫法雖然可檢測更低濃度的雌二醇水平，但對于濃度＜5pg/mL的樣本的檢測也是存在困難。

串聯質譜法在臨床上的應用逐步被意識到，由于生物體內存在多種雌激素的結構類似物，為提高檢測的特異性，多采用氣相色譜質譜聯用(GC-MS)分析法進行生物樣品中的雌激素的檢測，但氣相色譜質譜聯用分析法一般需要進行衍生化以降低沸點，促進氣化，提高靈敏度，前處理復雜，分析時間長，不利于臨床大樣本的推廣使用。液相色譜質譜聯用法雖然能明顯提高檢測的通量，但由于目標物極性弱，不利于電離，實現低濃度測定也較困難，為了提升靈敏度采用衍生化法對雌二醇效果較差，可能導致與蛋白結合的雌激素水解，影響結果的準確性，且耗時較長，操作復雜。同時，背景干擾也是影響其檢測限的一個重要因素。

因此本領域技術人員迫切需要解決的一個技術問題就是：如何提供一種前處理簡單高效、耗時短、取樣量少、試劑耗材成本低、易于規模化操作、靈敏度高(定量限低)、測量范圍寬的檢測方法，可滿足不同人群的檢測需求，特別是針對極低濃度水平的雌二醇的精準測量，可應用于臨床的大樣本人群推廣。

發明內容

基于此，本發明的目的是提供一種雌二醇和雌酮的檢測方法，其前處理簡單，定量限低，測量范圍寬。

具體方案如下：

一種雌二醇和雌酮的檢測方法，包括以下步驟：

樣本處理：取血清待測樣品，加入內標D5-雌二醇和¹³C3-雌酮的乙腈水溶液，再加入萃取劑，離心，取上清液與堿水溶液混合，離心，取上清液濃縮、復溶，離心，取上清液進行液相色譜質譜法測定。

在其中一些實施例中，所述堿水溶液為氨水溶液。