[發明專利]高產PHA的卡巴耶羅氏菌株、篩選方法及其產生PHA的方法

有效

• 申請號: 202011506187.4
• 申請日: 2020-12-18
• 公開（公告）號: CN112430557B
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發明（設計）人: 劉曉云;李偉康;劉昱;王北南;高軍;王樂
• 申請（專利權）人: 河北大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P7/62;C12R1/01
• 代理公司: 石家莊國域專利商標事務所有限公司 13112
• 代理人: 蘇艷肅

本發明提供了高產PHA的卡巴耶羅氏菌株、篩選方法及其產生PHA的方法，所述菌株保藏名稱為Caballeroniasp.Y5702，保藏單位廣東省微生物菌種保藏中心（GDMCC），保藏編號為GDMCC No.61153，保藏日期為2020年8月14日。保藏單位地址為廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓廣東省微生物研究所。PHA積累量已經達到菌體干重88%?95%，較高的占比為發酵后的提取工作節約了大量的資源，是一株可運用于工業發酵生產PHA的優秀菌株。

技術領域

本發明涉及一種高產PHA菌株，具體地說是涉及一種高產PHA的卡巴耶羅氏菌株(Caballeronia sp.Y5702)、篩選方法及其產生PHA的方法。

背景技術

聚羥基脂肪酸酯(PHA)是生物體中常見物質，參與各種生命活動的同時也作為微生物的碳源儲存物質累積在細胞中。作為新型材料其良好的熱加工性、優秀的生物相容性與可降解性，使其在尖端醫學、食品領域等有著巨大的應用前景。

近些年，我國工業發酵PHA存在菌株產量不理想、PHA積累量占比過低、重組菌株不穩定等諸多問題?，F有技術中通常采用下述方式篩選PHA菌株：將10mg尼羅藍染色劑溶于0.5ml丙酮中，去離子水稀釋至20ml，制備得到0.5mg/ml的尼羅藍染色溶液母液；繼續稀釋得到0.2mg/L的尼羅藍染色劑工作液，挑取發酵完成后的菌液，涂布于載玻片上火焰固定，冷卻后滴加尼羅藍染色劑工作液，置入烘箱50℃烘干；待烘干后利用8％冰醋酸溶液脫色1min，水洗后添加蓋玻片置于熒光顯微鏡下觀察熒光。該方法操作相對繁瑣，且存在較大誤差，不適用于大規模篩選。

同時，現有的培養基不能發揮菌株的PHA積累潛能。劉俊梅、王慶等人的團隊于2016年發表于微生物學通報的文章《紫外線和硫酸二乙酯復合誘變選育PHB高產菌株》中通過誘變篩選得到的菌株PHB產量達到15.94g/L，占細胞干重69.54％。尹進等人2016年發表于《生物工程學報》的文章《聚羥基脂肪酸酯的研究進展》中提及目前野生型菌株的PHA產量僅有5.72g/L，通過串聯啟動子構建工程菌株，才能使得其PHA累積量達到90％。

因此，提供高產PHA菌株及利用其高效制備PHA是目前需要解決的關鍵問題。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種高產PHA的卡巴耶羅氏菌株(Caballeroniasp.Y5702)，以解決現有發酵生產PHA的菌株產量不理想、PHA積累量占比過低、重組菌株不穩定等問題。

本發明的目的之二是提供前述高產PHA的卡巴耶羅氏菌株(Caballeroniasp.Y5702)產生PHA的方法。

本發明的目的之三是提供高產PHA的卡巴耶羅氏菌株的篩選方法。

本發明的目的之一是這樣實現的：

高產PHA的卡巴耶羅氏菌株，所述菌株名稱為Caballeronia sp.Y5702，保藏單位為：廣東省微生物菌種保藏中心(GDMCC)，保藏編號為GDMCC No.61153，保藏日期為2020年8月14日。

本發明的目的之二是這樣實現的：

利用卡巴耶羅氏菌株生產PHA的方法中，發酵培養步驟為：以制備用發酵培養基在溫度為25～30℃下培養45～55h；所述制備用發酵培養基中包括：葡萄糖30～50g/L，檸檬酸鈉1～5g/L，硫酸銨2～6g/L，蛋白胨12～18g/L，KH₂PO₄·12H₂O 0.5～0.7g/L，CaCl₂ 0.05～0.15g/Lg，K₂HPO₄ 0.2～0.4g/L，微量元素：HBO₃ 0.01～0.03g/L，Na₂MoO₄ 0.01～0.03g/L；pH為6.8～7.2。