[發明專利]一種顯色試劑以及測定抗壞血酸的方法

在審

• 申請號: 202011498092.2
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN112730393A
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發明（設計）人: 馬紀;黃國霞;李軍生;郭衛民;閻柳娟;汪煦;劉泉
• 申請（專利權）人: 廣西科技大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/33
• 代理公司: 廣州博士科創知識產權代理有限公司 44663
• 代理人: 宋佳

一種顯色試劑以及測定抗壞血酸的方法，利用顯色試劑中銅離子(II)過氧化物酶的活性，催化過氧化氫氧化3,3′,5,5′?四甲基聯苯胺(TMB)生成氧化態TMB(oxTMB)，使溶液呈藍色，在溶液中加入L?抗壞血酸，使oxTMB還原成TMB，溶液顏色消失或變淺，變淺的程度與L?抗壞血酸的濃度成正比，構建線性關系，從而確定L?抗壞血酸的含量。所述方法具有簡便、易準備、水溶性好、穩定性好和成本低等優點，可建立一種簡便、快速、成本低廉的檢測食品中抗壞血酸的方法，在食品分析領域具有潛在的應用價值。

技術領域

本發明涉及分析化學領域，具體是提供一種顯色試劑，以及利用該顯色試劑采用比色法測定L-抗壞血酸的方法。

背景技術

L-抗壞血酸是一種天然抗氧化劑，對維持人體正常生理機能起著極其重要的作用。L-抗壞血酸的缺乏可導致多種疾病，如壞血病、免疫力低下、感冒、抑郁癥、甚至是癌癥。但是攝入過量的L-抗壞血酸也會給身體帶來損害，患者會出現尿道結石、腹瀉、胃痙攣等癥狀。L-抗壞血酸的含量高低常作為某些疾病診斷及營養分析的重要指標。構建性能優良的檢測手段用于L-抗壞血酸的檢測是非常重要的。但L-抗壞血酸極易氧化失效，而且在某些食物中含量較低，因此研究一種快速、靈敏、成本低廉的L-抗壞血酸的檢測方法是十分必要的。

目前有關L-抗壞血酸的檢測方法主要有經典的碘量法、液相色譜法、化學發光法、毛細管電泳法、熒光光度法、紫外分光光度法等。其中，紫外分光光度法具有適用濃度范圍廣、準確度高、選擇性好、分析成本低、操作簡單、快速等優點。但也存在顯色劑準備繁瑣、納米材料制備復雜、檢測限高等不足。

發明內容

為了克服上述技術缺陷，本發明提供了一種顯色試劑以及測定抗壞血酸的方法，其檢測快速、靈敏、成本低且操作簡便。利用顯色試劑中銅離子(II)過氧化物酶的活性，催化過氧化氫氧化3,3′,5,5′-四甲基聯苯胺(TMB)生成氧化態TMB(即oxTMB)，使溶液呈藍色，溶液中加入L-抗壞血酸，由于L-抗壞血酸具有還原性，會使oxTMB還原成TMB，此時溶液顏色消失或變淺；具體的，加入不同濃度的L-抗壞血酸，溶液顏色的變化也會不同，即L-抗壞血酸在溶液中的濃度越大，顏色褪去的程度越大，變淺的程度與L-抗壞血酸的濃度成正比，構建線性關系，從而確定L-抗壞血酸的含量。

本發明采用的技術方案如下：

第一方面，本發明提供一種顯色試劑，由銅離子(II)溶液、3,3′,5,5′-四甲基聯苯胺溶液(即TMB溶液)、過氧化氫溶液和緩沖溶液配制而成。

第二方面，本發明提供一種顯色試劑的制備方法，取銅離子(II)溶液置于具塞試管中，加入TMB溶液和過氧化氫溶液，隨后用緩沖溶液定容，搖勻后置于水浴鍋中孵育。

第三方面，本發明提供一種采用所述顯色試劑測定抗壞血酸的用途。具體的，提供一種利用銅離子(II)的過氧化物酶活性測定抗壞血酸的用途。

優選的，利用銅離子(II)的過氧化物酶的活性，催化過氧化氫氧化3,3′,5,5′-四甲基聯苯胺(TMB)，使溶液呈藍色，溶液中加入L-抗壞血酸，此時溶液顏色消失或變淺，變淺的程度與L-抗壞血酸的濃度成正比，從而確定L-抗壞血酸的含量。

第四方面，本發明提供一種測定抗壞血酸的方法，其包括以下步驟：

(1)配制顯色試劑，測定在652nm處的紫外吸光度值A₀；

(2)向上述顯色試劑加入待測樣品，測定在652nm處的紫外吸光度值A；

(3)計算ΔA＝A₀-A，代入線性方程ΔA＝0.2617C+0.0471，求得C值；其中C為待測樣品中L-抗壞血酸的濃度，單位為μM。

第五方面，本發明提供一種測定抗壞血酸的方法，包括以下步驟：

a)配制不同濃度的L-抗壞血酸標準溶液；