[發明專利]一種血清代謝譜分子量校準品試劑盒及其制備方法、使用方法

有效

• 申請號: 202011490286.8
• 申請日: 2020-12-16
• 公開（公告）號: CN112526039B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: 鄔建敏;陳曉明;余捷凱;欒春燕
• 申請（專利權）人: 杭州匯健科技有限公司;杭州匯健智譜醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/08;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 杭州裕陽聯合專利代理有限公司 33289
• 代理人: 金方瑋

本發明涉及一種血清代謝譜分子量校準品試劑盒及其制備方法、使用方法，包括代謝分子校準品、溶解液與分子量校準列表；其中，代謝分子校準品與溶解液的配比為：1份代謝分子校準品對應1?5份溶解液。本發明的分子量校準品取自生物樣本，成本低，制備方便；可涵蓋代謝分子檢測的100?1000Da范圍，且同時適用于正離子和負離子檢測模式，可根據需要選擇分子量校準品和校準列表；使用方便，可適用于多種離子源質譜儀和多種生物樣本的代謝分子區的檢測和分子量校準；本發明適用于代謝小分子的準確分子量測定、代謝小分子的結構鑒定和解析、分子精準質譜成像。

技術領域

本發明涉及質譜技術領域，特別涉及一種血清代謝譜分子量校準品試劑盒及其制備方法、使用方法。

背景技術

代謝分子因能實時反映生物體的表型變化、生理和病理情況，其在血液、唾液、尿液、組織、細胞等復雜生物樣本中的組成變化與疾病監控密切相關。MALDI-MS基質輔助激光解吸離子化質譜技術是一種高通量的質譜技術，其不僅在蛋白、多肽、核酸等大分子的檢測和分析中應用廣泛，近年來也在代謝小分子檢測中引起高度重視。但因代謝分子組成種類繁多，以脂質為例，已被發現和命名的就超過20000種，在以MALDI及其他直接離子化質譜技術為平臺進行復雜生物樣本的直接檢測和分析時，分子量校準極為重要，直接影響代謝譜圖的可靠性和精準性。生物樣本中的代謝分子組成復雜，部分以簇峰形式出現，在MALDI等直接離子化質譜儀種檢測范圍主要集中在50-1200Da范圍內。目前尚未有能夠全覆蓋該范圍的小分子分子量校準品的試劑盒或產品。

由Avanti開發的商業化脂質校準品能夠覆蓋400-900Da，但由多種脂質純品混合而成，成本較高，價格昂貴，且因溶解于甲醇溶液中易揮發，不易保存。CHCA、DHB、SA等MALDI中常用的有機酸也可作為小分子的分子量校準品，但其易形成高度不均勻的結晶，從而影響質譜檢測時的分子量精度，達不到合適的校準效果，且其形成的簇峰分子量已被解析的范圍也僅在50-500Da范圍內，不足以覆蓋高分子區的代謝分子的檢測。

專利CN104597114B提出以多種脂肪酸的混合物作為負離子檢測模式下代謝分子區的分子量校準品，但也僅能校準100-350Da范圍。根據校準原則，若校準品的分子量不能均勻分布于所需檢測范圍，則易發生校準嚴重偏移的現象。

專利CN109632938A利用AgNO₃@PDA納米顆粒中的銀簇峰作為分子量校準品，代謝分子點樣于AgNO₃@PDA納米顆粒表面，銀簇成為正離子檢測模式下的內標校準品。該方法可以覆蓋300-1000Da分子量范圍，但銀簇峰會嚴重干擾復雜生物樣本的譜圖出峰，同時改變代謝分子的離子加和形式，代謝分子的譜形與納米顆粒在基底上的分布情況相關，譜圖的穩定性無法得到保障。且銀簇僅在正離子模式下形成可計算精準分子量的分子列表，無法同時用于負離子模式下的代謝分子區的校準。同時因在直接離子化質譜檢測技術中，離子抑制效應無法避免，其他內標法也通常不利于復雜生物樣本的精準檢測。

市場上亟待開發低成本、使用方便、覆蓋范圍廣的用于代謝分子的分子量校準試劑盒。

發明內容

本發明的目的是為了解決現有技術的不足而提供了一種血清代謝譜分子量校準品試劑盒，本發明的試劑盒的制備方法簡單，可根據校準范圍調整試劑盒的配方和分子量校準列表，兼顧負離子模式和正離子模式，避免不同檢測模式分別進行校準的缺點；校準精度高；試劑盒可適用于血清的質譜檢測應用場景。

本發明的目的之二是提供該試劑盒的制備方法。

本發明的目的之三是提供該試劑盒的使用方法。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：