[發(fā)明專利]一種硫酸葡聚糖鈉誘導(dǎo)白色念珠菌預(yù)先定植的結(jié)腸炎模型的構(gòu)建方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011487039.2
• 申請日: 2020-12-16
• 公開（公告）號(hào): CN112514849A
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邵菁;葛雨竹;陳夢麗;韓志君;馬克龍;汪天明;吳大強(qiáng);顏貴明;汪長中
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號(hào): A01K67/02
• 分類號(hào): A01K67/02
• 代理公司: 蘇州翔遠(yuǎn)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32251
• 代理人: 王華

一種硫酸葡聚糖鈉誘導(dǎo)白色念珠菌預(yù)先定植的結(jié)腸炎模型的構(gòu)建方法，包括下列步驟：步驟1：將濃度為0.8?1.2×10⁹ CFU/mL的白念珠菌菌液灌入SPF級(jí)6?8周的小鼠；步驟2：給予小鼠自由飲用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的硫酸葡聚糖鈉水溶液7 d，期間斷絕其他飲水，且每隔1 d更換新鮮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的硫酸葡聚糖鈉水溶液；步驟3：然后連續(xù)4天，每天上午9時(shí)給予白念株菌灌胃，1.0×10⁸ CFU/只，生理鹽水自由飲用，標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料自由飲食；從第5天起，停止白念株菌灌胃且開始自由飲用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的硫酸葡聚糖鈉水溶液7 d，期間停止飲水，自由飲食；室溫18?22℃，相對濕度55%?70%，形成結(jié)腸炎模型。本發(fā)明采用自由飲用DSS（MW:36000~50000）水溶液的方法建立動(dòng)物模型，簡單易行。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物模型構(gòu)建技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種硫酸葡聚糖鈉誘導(dǎo)白色念珠菌預(yù)先定植的結(jié)腸炎模型的構(gòu)建方法。

背景技術(shù)

日本學(xué)者于1985年首次應(yīng)用葡聚糖硫酸鈉（Dextran Sulfate Sodium Salt，DSS）制備了鼠潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative Colitis，UC）模型，此后該方法廣泛用于篩選治療炎癥性腸病（Inflammatory Bowel Disease，IBD）的新方法和臨床前新藥物的開發(fā)，也用于研究IBD的發(fā)病機(jī)制。與健康人相比，UC患者腸道真菌數(shù)量更多，種類更豐富，其中最常見的是念珠菌屬的改變。Zwolinska-Wcislo等通過培養(yǎng)法發(fā)現(xiàn)UC患者糞便中真菌增多，腸道念珠菌屬定植率更高，在腸黏膜上定植的念珠菌中91%為白念珠菌。Ott等分析了47名對照和57例IBD患者結(jié)腸黏膜樣本的真菌，用DGGE法發(fā)現(xiàn)與對照組相比IBD患者消化道念珠菌屬（特別是杜氏念珠菌和近平滑念珠菌）增多，表明真菌生態(tài)失調(diào)與該疾病相關(guān)。有數(shù)據(jù)表明在腸道炎癥過程中糞便菌群移植（FMT）可能通過減少念珠菌豐度和腸道真菌誘導(dǎo)的促炎反應(yīng)而發(fā)揮作用。Rakoff等研究證明宿主先天免疫和腸道微生物之間的相互作用是決定DSS誘導(dǎo)的腸道發(fā)病機(jī)制的關(guān)鍵。該模型的建立可用于研究先天性免疫系統(tǒng)在結(jié)腸炎發(fā)生的作用，為研究宿主遺傳、腸道先天免疫、微生物、飲食和其他環(huán)境因素之間的相互作用的機(jī)制提供支持。

DSS誘發(fā)結(jié)腸炎模型的常見用途包括研究先天免疫系統(tǒng)如何參與腸道炎癥，以及尋找在損傷期間/之后維持或重建上皮完整性的重要環(huán)節(jié)。腸道黏膜免疫紊亂以及腸道菌群失調(diào)與潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病有密切關(guān)系，一旦腸道菌群發(fā)生比例失調(diào)或者定位轉(zhuǎn)移，就會(huì)加重腸道疾病、促進(jìn)人體過快衰老，甚至導(dǎo)致癌癥的發(fā)生。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種硫酸葡聚糖鈉誘導(dǎo)白色念珠菌預(yù)先定植的結(jié)腸炎模型的構(gòu)建方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是：一種硫酸葡聚糖鈉誘導(dǎo)白色念珠菌預(yù)先定植的結(jié)腸炎模型的構(gòu)建方法，包括下列步驟：

步驟1：將濃度為0.8-1.2×10⁹ CFU/mL的白念珠菌菌液灌入SPF級(jí)6-8周的小鼠；

步驟2：給予小鼠自由飲用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3% 的硫酸葡聚糖鈉水溶液7 d，期間斷絕其他飲水，且每隔1 d更換新鮮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3% 的硫酸葡聚糖鈉水溶液；

步驟3：然后連續(xù)4天，每天上午9時(shí)給予白念株菌灌胃，1.0×10⁸ CFU/只，生理鹽水自由飲用，標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料自由飲食；從第5天起，停止白念株菌灌胃且開始自由飲用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3% 的硫酸葡聚糖鈉水溶液7 d，期間停止飲水，自由飲食；室溫18-22℃，相對濕度55%-70% ，形成結(jié)腸炎模型。

優(yōu)選的技術(shù)方案為：小鼠為C57BL/6小鼠或BALB/c小鼠。

優(yōu)選的技術(shù)方案為：步驟1中，濃度為0.8-1.2×10⁹ CFU/mL的白念珠菌菌液的用量為0.2-0.5mL/只。

由于上述技術(shù)方案運(yùn)用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有的優(yōu)點(diǎn)是：