[發(fā)明專(zhuān)利]一種新型冠狀病毒IgM、IgG和IgA聯(lián)合檢測(cè)試劑盒以及檢測(cè)方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202011478302.1 | 申請(qǐng)日： | 2020-12-15 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN112858674A | 公開(kāi)（公告）日： | 2021-05-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 黃若磐;張本越 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 瑞博奧（廣州）生物科技股份有限公司 |
| 主分類(lèi)號(hào)： | G01N33/569 | 分類(lèi)號(hào)： | G01N33/569;G01N33/543;G01N33/533 |
| 代理公司： | 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227 | 代理人： | 蘇云輝 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 新型 冠狀病毒 igm igg iga 聯(lián)合 檢測(cè) 試劑盒 以及 方法 | ||
1.一種新型冠狀病毒IgM、IgG和IgA的聯(lián)合檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括：
包被有新型冠狀病毒SARS-CoV-2抗原的珠子、包被有牛血清白蛋白的珠子和熒光素標(biāo)記的抗體或其抗原的結(jié)合片段；
所述SARS-CoV-2抗原為SARS-CoV-2的蛋白或其片段；
所述抗體為抗人IgG抗體，抗人IgA抗體和抗人IgM抗體；
所述珠子至少為兩種熒光強(qiáng)度不同的珠子。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聯(lián)合檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述SARS-CoV-2的蛋白或其片段為SARS-CoV-2刺突蛋白或其片段以及SARS-CoV-2核衣殼蛋白或其片段中的至少一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聯(lián)合檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述SARS-CoV-2抗原為SARS-CoV-2刺突蛋白受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(RBD)的氨基酸Arg319至Phe541，其氨基酸序列如SEQ IDNO：2所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聯(lián)合檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述珠子為熒光強(qiáng)度不同且尺寸不同的珠子。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聯(lián)合檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述珠子為紅色熒光珠或藍(lán)色熒光珠。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聯(lián)合檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述熒光素選自異硫氰酸熒光素、Cy2、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7、Cy7.5、Texas Red、Alexa Fluor、HILYTETM Fluor、DYLITETM Fluor、RayBright.RTM V450、RayBright.RTMB488或紅色熒光蛋白。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聯(lián)合檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述抗人IgG抗體與RayBright.RTM V450偶聯(lián)，所述抗人IgA抗體與RayBright.RTMB488偶聯(lián)，所述抗人IgM抗體與R-PE偶聯(lián)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聯(lián)合檢測(cè)試劑盒，其特征在于，還包括洗滌緩沖液和分析稀釋液；
所述洗滌緩沖液為含0.1％吐溫-20的PBS溶液；
所述分析稀釋液為PBS溶液。
9.一種聯(lián)合檢測(cè)生物樣本中新型冠狀病毒IgM、IgG和IgA的方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟1：將權(quán)利要求1至8任意一項(xiàng)所述的聯(lián)合檢測(cè)試劑盒中的每一個(gè)包被有所述新型冠狀病毒SARS-CoV-2抗原的珠子與待測(cè)樣品進(jìn)行孵育；
步驟2：將每一個(gè)包被有所述牛血清白蛋白的珠子分別與待測(cè)樣品進(jìn)行孵育；
步驟3：合并步驟1和步驟2所述孵育后的珠子，加入熒光素標(biāo)記的抗體或其抗原的結(jié)合片段進(jìn)行孵育，獲得的偶聯(lián)物分別記為抗原珠和對(duì)照珠；
步驟4：分別測(cè)定每一個(gè)抗原珠和每一個(gè)對(duì)照珠的表面每種熒光素的熒光強(qiáng)度，并計(jì)算每種抗原珠和每種對(duì)照珠的平均熒光強(qiáng)度，再計(jì)算同種抗原珠和對(duì)照珠平均熒光強(qiáng)度的比率；
當(dāng)一種所述抗原珠表面一種熒光素的平均熒光強(qiáng)度≥200，且所述比率≥1.5時(shí)，判斷所述待測(cè)樣品中存在SARS-CoV-2；
當(dāng)一種所述抗原珠表面一種熒光素的平均熒光強(qiáng)度＜200，且所述比率≤1時(shí)，判斷所述待測(cè)樣品中不存在SARS-CoV-2。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，步驟1中所述待測(cè)樣品為血清或血漿；
步驟1中每一個(gè)所述珠子位于一個(gè)單獨(dú)體積的容器中。
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