[發(fā)明專利]細胞凋亡誘導劑和載藥囊泡及其應用

有效

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• 申請日: 2020-12-15
• 公開（公告）號: CN112553162B
• 公開（公告）日: 2023-01-13
• 發(fā)明（設計）人: 童雅琪;陳彬;張一
• 申請（專利權）人: 湖北盛齊安生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;A61K9/50;A61K47/46;A61K45/00;A61K31/704;A61P35/00
• 代理公司: 北京隆源天恒知識產(chǎn)權代理有限公司 11473
• 代理人: 吳航

本發(fā)明提供了一種細胞凋亡誘導劑和載藥囊泡及其應用，屬于生物技術領域。所述細胞凋亡誘導劑包含有效量的酵母甘露聚糖和有效量的鈣離子。本發(fā)明利用酵母甘露聚糖作為鈣離子載體，能夠提高細胞膜對鈣離子的通透性，在短時間內(nèi)即可在胞內(nèi)聚集高濃度的游離鈣離子，進而觸發(fā)細胞凋亡程序，產(chǎn)生細胞囊泡，得到的細胞囊泡產(chǎn)率高、均一性好，平均細胞囊泡直徑小。以該細胞囊泡包裹藥物，可以高效穿過腫瘤細胞的屏障并被腫瘤細胞內(nèi)吞，進而提高藥物遞送效率。

技術領域

本發(fā)明涉及生物技術領域，特別涉及一種細胞凋亡誘導劑，還涉及使用所述細胞凋亡誘導劑誘導細胞凋亡制備載藥囊泡的方法，以及由此制備得到的所述載藥囊泡及含有該所述載藥囊泡的藥物組合物。

背景技術

近年來，腫瘤的發(fā)病率逐年提高。盡管科學家們一直在探索以各種方式來攻克腫瘤，但臨床上對腫瘤的治愈率仍未顯示出明顯的提高。癌癥的治療手段主要有手術治療、放射治療和藥物治療等，然而這些傳統(tǒng)的癌癥治療手段由于靶向性較差，毒性較強，在殺傷腫瘤細胞的同時也會損傷正常細胞，產(chǎn)生不良反應，具有一定的局限性。為了克服傳統(tǒng)的癌癥治療手段的毒副作用，越來越多的科學家開始采用特異性的脂質(zhì)體等載體包裹化療藥物，使化療藥物選擇性地在腫瘤部位釋放，甚至選擇性地進入腫瘤細胞內(nèi)，從而達到選擇性殺傷腫瘤細胞的效果。但是外源性載體對生物機體也有一定的毒副作用，同時臨床使用的載體顆粒的粒徑也使其容易穿過正常細胞的細胞膜，從而增加了載體及其所包裹的化療藥物對機體的毒副作用。

基于此，部分科學家開始采用腫瘤細胞來源的細胞囊泡作為新一代的藥物遞送系統(tǒng)，該細胞囊泡攜帶有原腫瘤細胞的生物活性分子，表現(xiàn)出原腫瘤細胞的分子生物印記，具有靶向性強、循環(huán)時間長、生物屏障可達等諸多優(yōu)點，還可以有效地激活機體免疫應答，增強化療藥物的治療效果。因此，腫瘤細胞來源的細胞囊泡受到越來越多的關注。

目前，通常采用紫外光照射誘導腫瘤細胞凋亡或者施用有效量的化療藥物誘導腫瘤細胞凋亡以制備腫瘤細胞來源的細胞囊泡。采用紫外光照射誘導腫瘤細胞凋亡的方法時，由于紫外線穿透力不強，離光源近的細胞凋亡程度過高，而離光源遠的細胞凋亡程度又不夠，導致得到的細胞囊泡產(chǎn)率低、均一性差。采用導腫瘤細胞凋亡的方法時，由于不同的化療藥物誘導細胞凋亡的機理不同，例如蒽環(huán)類、鉑類化療藥物直接破壞DNA雙螺旋架構，使其無法復制，而抗代謝類化療藥物通過與合成正常代謝物所必需的酶相結合，從而干擾核酸的合成。因此，并不是所有的化療藥物都能夠誘導細胞凋亡或者釋放細胞囊泡，例如紫衫類、長春堿類化療藥物等，而且，采用化療藥物誘導細胞凋亡得到的細胞囊泡的均一性差，限制了該方法的運用。

發(fā)明內(nèi)容

針對以上現(xiàn)有技術中細胞囊泡的產(chǎn)率低、均一性差的問題，本發(fā)明提供了一種細胞凋亡誘導劑，以及提供了該細胞細胞凋亡誘導劑誘導細胞凋亡制備載藥囊泡的方法，和由此制備得到的載藥囊泡及含有該載藥囊泡的藥物組合物。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明具體通過以下技術實現(xiàn)：

一種細胞凋亡誘導劑，包含有效量的酵母甘露聚糖和有效量的鈣離子。

進一步地，所述細胞凋亡誘導劑包含5-20mg/L的酵母甘露聚糖和50-800μmol/L的鈣離子。

進一步地，所述細胞凋亡誘導劑包含10mg/L的酵母甘露聚糖和100-150μmol/L的鈣離子。

進一步地，所述酵母甘露聚糖為產(chǎn)朊假絲酵母甘露聚糖、畢赤酵母甘露聚糖、面包酵母甘露聚糖、啤酒酵母甘露聚糖、布拉迪酵母甘露聚糖中的一種或多種。

另外，本發(fā)明提供了上述所述的細胞凋亡誘導劑在誘導細胞凋亡或制備載藥囊泡中的應用。

另外，本發(fā)明提供了一種載藥囊泡的制備方法，包括以下步驟：向處于對數(shù)生長期的腫瘤細胞懸液中加入上述所述的細胞凋亡誘導劑，共培養(yǎng)一段時間以誘導細胞凋亡產(chǎn)生細胞囊泡，然后收集所述細胞囊泡，將所述細胞囊泡與有效量的藥物孵育，得到載藥囊泡。

進一步地，所述共培養(yǎng)的時間為60min。