[發明專利]一種非疾病診斷的檢測PD-L1的免疫傳感器系統

有效

• 申請號: 202011474811.7
• 申請日: 2020-12-15
• 公開（公告）號: CN112684182B
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發明（設計）人: 陳紅霞
• 申請（專利權）人: 上海大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/553;G01N33/543;G01N27/26;G01N21/552
• 代理公司: 上海劍秋知識產權代理有限公司 31382
• 代理人: 應風曄

1.一種非疾病診斷的檢測PD-L1的免疫傳感器系統，其特征在于，包括二胺類客體分子、pSC₄-AuNPs、附著有pSC₄的芯片、PD-L1抗體和Homing ?Peptide功能化的磁包銀納米顆粒，

其中，所述二胺類客體分子與pSC₄-AuNPs結合后在所述附著有pSC₄的芯片表面自組裝構筑作為增敏層的三維有序納米結構3D-AuNPs，所述PD-L1抗體吸附在所述增敏層上，所述Homing ?Peptide功能化的磁包銀納米顆粒被設置為經過與分析物反應后添加到所述附著有pSC4的芯片表面從而與所述PD-L1抗體進行特異性識別；

其中，所述Homing ?Peptide功能化的磁包銀納米顆粒的制備方法如下：

(1)將1mL磁包銀納米顆粒溶液用PBS洗三次后，加入特異性的10μL ?1mg/mL ?Homing?Peptide，所述磁包銀納米顆粒與特異性的Homing ?Peptide的體積比為2:1，反應時間4小時，

(2)磁分離，棄上清，重懸于PBS中，即得到Homing ?Peptide功能化的磁包銀納米顆粒；

其中，所述3D-AuNPs的制備方法為將100μL的2mM二胺類客體分子與400μL的pSC₄-AuNPs反應10分鐘。

2.一種制備如權利要求1所述的非疾病診斷的檢測PD-L1的免疫傳感器系統的方法，其特征在于，包括如下步驟：(a)將3D-AuNPs添加到附著有pSC₄的芯片表面上，

(b)在多參數表面等離子體共振儀上采用2μL/min的流速添加500μL的1μg/mL PD-L1抗體與3D-AuNPs反應，后用緩沖液洗滌芯片表面以洗脫未連接的抗體，

(c)將芯片與1mg/mL的BSA溶液反應半小時，以避免芯片表面上的非特異性吸附，同時，所述Homing? Peptide功能化的磁包銀納米顆粒在25℃與不同濃度的分析物反應30min，然后用外磁分離，

(d)將步驟(c)反應后的Homing ?Peptide功能化的磁包銀納米顆粒添加到芯片表面，從而被表面修飾PD-L1抗體特異性識別，信號可以通過Homing? Peptide功能化的磁包銀納米顆粒進一步放大。

3.一種利用如權利要求1所述的非疾病診斷的檢測PD-L1的免疫傳感器系統檢測PD-L1的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(i)Homing? Peptide功能化的磁包銀納米顆粒在25℃與不同濃度的分析物反應30min，然后用外磁分離，

(ii)將步驟(i)反應后的Homing ?Peptide功能化的磁包銀納米顆粒添加到芯片表面，從而被表面修飾PD-L1抗體特異性識別，

(iii)通過SPR或者電化學定量監測PD-L1濃度。