[發(fā)明專利]一種以太白貝母鱗莖為外植體的組織培養(yǎng)方法

有效

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• 申請日: 2020-12-14
• 公開（公告）號: CN112586352B
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發(fā)明（設計）人: 朱文濤;周毅;王紅蘭;杜玖珍;孫洪兵;楊萍;連艷;蔣舜媛
• 申請（專利權(quán)）人: 四川省中醫(yī)藥科學院;成都中醫(yī)藥大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 成都金英專利代理事務所(普通合伙) 51218
• 代理人: 袁英

1.一種以太白貝母鱗莖為外植體的組織培養(yǎng)方法，其特征在于：包括下述步驟：

（1）外植體表面滅菌

選擇3-4年生健康無損傷的太白貝母鱗莖，將太白貝母鱗莖外層的鱗瓣掰開并沖洗干凈；將沖洗干凈的鱗瓣在超凈工作臺內(nèi)進行表面滅菌；

表面滅菌具體過程為，先用75%酒精處理10-20s，然后用無菌蒸餾水沖洗2次，隨后再用0.1%升汞處理10-15min，最后用無菌蒸餾水沖洗3次；

（2）初代培養(yǎng)；

將經(jīng)過步驟（1）處理后的鱗瓣切成綠豆大小的小塊，并接種至初代培養(yǎng)基中，然后置于LED光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)60天；培養(yǎng)溫度為20±2℃，光照時間為12 h/d，光照強度為1900-2100Lx；培養(yǎng)60天后，誘導出無菌鱗球莖；

所述初代培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基、激素、蔗糖和瓊脂組成；其中，

所述激素為NAA和6-BA，或者NAA和ZT；

所述激素為NAA和6-BA時，所述NAA的添加量為3.0 mg/L；所述6-BA的添加量為0.5-2.0mg/L；

所述激素為NAA和ZT時，所述NAA的添加量為3.0 mg/L；所述ZT的添加量為0.5-1.0 mg/L；

所述蔗糖的添加量為25-35g/L；

所述瓊脂的添加量為5-10g/L；

（3）增殖培養(yǎng)

將步驟（2）所誘導出的無菌鱗球莖切成綠豆大小的小塊，并接種至增殖培養(yǎng)基中，然后置于LED光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)40天；培養(yǎng)溫度為20±2℃，光照時間為12 h/d，光照強度為1900-2100Lx；培養(yǎng)40天后，誘導出無菌鱗球莖；

所述增殖培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基、激素、蔗糖、瓊脂以及香蕉粉和/或土豆泥組成；其中，

所述激素為NAA和ZT，或者為NAA和6-BA；

所述激素為NAA和ZT時，所述NAA的添加量為0.5-3 mg/L,所述ZT的添加量為0.5 mg/L；

所述激素為NAA和6-BA時，所述NAA的添加量為1.5-3mg/L, 所述6-BA的添加量為0.5mg/L；

所述蔗糖的添加量為20-40g/L；

所述瓊脂的添加量為5-10g/L；

所述香蕉粉的添加量為20-60g/L；

所述土豆泥的添加量為20-60g/L；

（4）誘芽培養(yǎng)

將步驟（3）中誘導出的無菌鱗球莖從組織塊上分離下來，并接種至誘芽培養(yǎng)基中，然后置于LED光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)50天；培養(yǎng)溫度為20±2℃，光照時間為12h/d，光照強度為1900-2100Lx；培養(yǎng)50天后，誘導出無菌芽；

所述誘芽培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基、激素、蔗糖和瓊脂組成；其中，

所述激素為NAA和ZT；所述NAA的添加量為0.5-1 mg/L，所述ZT的添加量為1-2 mg/L；

所述蔗糖的添加量為20-40g/L；

所述瓊脂的添加量為5-10g/L；

（5）生根培養(yǎng)

將步驟（4）中誘導出的無菌芽接種至生根培養(yǎng)基中，然后置于LED光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)40天；培養(yǎng)溫度為20±2℃，光照時間為12h/d，光照強度為1900-2100Lx；培養(yǎng)40天后，得到長出根系的太白貝母組培苗；

所述生根培養(yǎng)基由1/2MS培養(yǎng)基、激素、蔗糖和瓊脂組成；其中，

所述激素為NAA和IBA；所述NAA的添加量為0.5-1mg/L，所述IBA的添加量為0.5mg/L；

所述蔗糖的添加量為20-40g/L；

所述瓊脂的添加量為5-10g/L。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以太白貝母鱗莖為外植體的組織培養(yǎng)方法，其特征在于：所述步驟（2）中，所述初代培養(yǎng)基中，所述激素為NAA和ZT，所述NAA的添加量為3.0 mg/L，所述ZT的添加量為1.0 mg/L；所述蔗糖的添加量為30g/L；所述瓊脂的添加量為7g/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以太白貝母鱗莖為外植體的組織培養(yǎng)方法，其特征在于：所述步驟（3）中，所述增殖培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基、激素、蔗糖、瓊脂以及土豆泥組成；其中，所述激素為NAA和ZT，所述NAA的添加量為1.5 mg/L,所述ZT的添加量為0.5 mg/L；所述蔗糖的添加量為20g/L；所述土豆泥的添加量為20g/L；所述瓊脂的添加量為7g/L。