[發明專利]基于納米金的分裂型適體傳感器及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011437992.6
• 申請日: 2020-12-11
• 公開（公告）號: CN112630439A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 姜利英;任林嬌;秦自瑞;張培;孟曉龍;徐曉萍;張吉濤;陳青華
• 申請（專利權）人: 鄭州輕工業大學
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/573;G01N21/64
• 代理公司: 鄭州優盾知識產權代理有限公司 41125
• 代理人: 冉珊敏

1.基于納米金的分裂型適體傳感器的制備方法，其特征在于，步驟如下：

（1）將核苷酸鏈P2加入Tris-HCl溶液中反應2h進行激活，得P2溶液；

（2）向P2溶液中加入AuNPs，常溫反應20min后，再加入檸檬酸鈉溶液并在37℃恒溫振蕩培養3 h，再離心取底液即得到AuNPs@P2耦合物；

（3）向AuNPs@P2耦合物中加入核苷酸鏈P1，室溫培養2h，即得基于納米金的分裂型適體傳感器工作液。

2.根據權利要求1所述的基于納米金的分裂型適體傳感器的制備方法，其特征在于：所述步驟（1）中，核苷酸鏈P2的序列如5′-TGCGGAGGAAGGT-(CH₂)6-SH-3′所示。

3. 根據權利要求1所述的基于納米金的分裂型適體傳感器的制備方法，其特征在于：所述步驟（1）中，Tris-HCl溶液的pH=7、濃度為10 mmol/L，P2溶液的濃度為5 μmol/L。

4. 根據權利要求1所述的基于納米金的分裂型適體傳感器的制備方法，其特征在于：所述步驟（2）中，AuNPs的濃度為1 nmol/L，檸檬酸鈉溶液的濃度為500 mmol/L、pH=5。

5.根據權利要求4所述的基于納米金的分裂型適體傳感器的制備方法，其特征在于：所述P2溶液、AuNPs和檸檬酸鈉溶液的體積比為20:8:1。

6. 根據權利要求1所述的基于納米金的分裂型適體傳感器的制備方法，其特征在于：所述步驟（2）中，離心的條件為14000 r/min離心15min。

7.根據權利要求1所述的基于納米金的分裂型適體傳感器的制備方法，其特征在于：所述步驟（3）中，核苷酸鏈P1的序列如5′-FAM-ACCTGGGGGAGTAT-3′所示，AuNPs@P2耦合物與核苷酸鏈P1的物質的量比為1:1。

8.權利要求1-7任一項制備方法所制備的分裂型適體傳感器。

9.權利要求8所述的分裂型適體傳感器在非疾病的診斷和治療中檢測三磷酸腺苷中的應用。

10. 根據權利要求9所述的應用，其特征在于，步驟如下：向工作液中加入20μL待測樣品用500 mmol/LTris-HCl緩沖液將溶液的總體積定容至600 μL，利用熒光分光光度計對含有ATP的AuNPs@P2-ATP-P1復合物進行熒光檢測，將熒光強度代入線性回歸方程Y=66.54-7.31X，相關系數R=0.99，即可得到待測樣品的濃度。