[發明專利]一種NKT細胞培養方法

在審

• 申請號: 202011436752.4
• 申請日: 2020-12-11
• 公開（公告）號: CN112442482A
• 公開（公告）日: 2021-03-05
• 發明（設計）人: 段海峰;薛冰華;于婷婷;解晶;劉麗華;龐如夢;陸穎;張超
• 申請（專利權）人: 北京雙因生物科技有限公司;北京匯智馳康生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N5/10
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 陳波

一種NKT細胞培養方法。本申請提供了一種表達IL?2和IL?21的間充質干細胞，以及使用該間充質干細胞在不添加細胞因子的情況下培養NKT細胞的方法和相應的細胞培養容器及應用。

技術領域

本申請屬于細胞培養和免疫治療領域，具體地，本申請提供了一種使用表達IL-2和IL-21的間充質干細胞培養NKT細胞的方法以及相應培養工具。

背景技術

NKT(natural killer T)細胞是一群細胞表面既有T細胞受體TCR，又有NK細胞受體的特殊T細胞亞群。NKT細胞能大量產生細胞因子。NKT細胞受到刺激后，可以分泌大量的IL-4，IFN-γ，GM-CSF，IL-13和其它細胞因子和趨化因子，發揮免疫調節作用，NKT細胞是聯系固有免疫和獲得性免疫的橋梁之一。

NKT細胞作為具有強殺傷力的一類細胞群，具有廣譜的抗腫瘤作用，已經開始廣泛應用于臨床治療中，而且毒性較低。經體外培養得到的NKT細胞具有很好的抗腫瘤活性和保健作用。目前培養NKT細胞的常規方法是在外周血單個核細胞的培養基中加入活化抗體和細胞因子，經過2-3周的培養得到大量的NKT細胞。在傳統培養過程中，需要添加各類因子，這使得培養流程較為復雜，同時成本也較高。而且常規培養方法得到的NKT細胞產量偏低，免疫細胞里面有大量的T細胞。大量T細胞的存在不僅降低了NKT細胞的純度也影響了NKT細胞的增殖，所以目前急需改進現有的培養NKT細胞的工藝。

發明內容

為解決以上問題，申請人設計了一種新的NKT細胞培養思路，使用表達IL-2和IL-21的間充質干細胞作為飼養層培養NKT細胞，以簡化NKT細胞培養過程中對培養基配制/控制流程,降低操作難度和費用；同時提高NKT細胞純度和保持殺傷效果。

一方面，本申請提供了一種間充質干細胞，其特征在于表達IL-2和IL-21。

進一步地，所述間充質干細胞為臍帶間充質干細胞。

進一步地，所述IL-2序列為SEQ ID NO.1或其變體；

進一步地，所述IL-21序列為SEQ ID NO.3或其變體；

進一步地，所述IL-2和IL-21基因序列為SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.4或其變體；

另一方面，本申請提供了上述間充質干細胞在培養免疫細胞中的應用。

進一步地，所述免疫細胞為NKT細胞。

進一步地，所述應用中間充質干細胞作為飼養層細胞。

另一方面，本申請提供了NKT細胞的培養方法，其特征在于使用上述間充質干細胞作為飼養層培養NKT細胞。

另一方面，本申請提供了一種細胞培養容器，其特征在于包括上述間充質干細胞。

進一步地，所述細胞培養容器為培養瓶。

另一方面，本申請提供了上述細胞培養容器在培養NKT細胞中的應用。

本申請中的間充質干細胞包括各種來源的間充質干細胞，來源包括但不限于脂肪、脊髓、臍帶、肌肉、粘膜等，分離間充質干細胞的方法可以參見干細胞治療和細胞培養領域的相關文獻和書籍，例如《間充質干細胞基礎與臨床》，韓忠朝，科學出版社。

本申請中的IL-2和IL-21基因和蛋白序列本領域技術人員可以從諸如Genbank等的數據庫中獲取。也可以根據專利或者非專利文獻的記載得到；所述IL-2和IL-21基因和蛋白序列可以為人或哺乳動物IL-2和IL-21天然或變體基因和蛋白序列。