[發(fā)明專利]一種甜瓜抗白粉病相關(guān)SSR分子標(biāo)記及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011430329.3
• 申請(qǐng)日: 2020-12-07
• 公開（公告）號(hào): CN112359132B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高超;孫建磊;焦自高;王崇啟;董玉梅;肖守華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 濟(jì)南誠智商標(biāo)專利事務(wù)所有限公司 37105
• 代理人: 韓百翠

本發(fā)明公開了一種甜瓜抗白粉病相關(guān)SSR分子標(biāo)記。本發(fā)明通過篩選在兩個(gè)親本(抗病和感病)和F2代兩個(gè)極端分離池中存在的多態(tài)性引物，并通過自然群體驗(yàn)證，獲得的與甜瓜抗白粉病基因緊密連鎖的引物，所述SSR分子標(biāo)記位于甜瓜2號(hào)染色體上，由一對(duì)引物構(gòu)成，上游引物為：AGAGGTAGATTGTGTTCCG；下游引物為：GGGTAAAGATCATATAAAATC，擴(kuò)增產(chǎn)物大小為300bp左右。上述SSR分子標(biāo)記可以用于甜瓜抗白粉病材料篩選及分子標(biāo)記輔助育種。本發(fā)明的SSR標(biāo)記可以在甜瓜候選材料的任何階段對(duì)其進(jìn)行白粉病抗性鑒定和篩選，具有高效、限制少、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種甜瓜抗白粉病相關(guān)SSR分子標(biāo)記及應(yīng)用，屬于植物抗病育種技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

甜瓜(Cucumis melo L.)屬葫蘆科(Cucurbitaceae)黃瓜屬(Cucumis)一年生二倍體植物，其果實(shí)香脆清甜、風(fēng)味獨(dú)特、營養(yǎng)物質(zhì)豐富，是一種世界范圍內(nèi)廣泛種植的經(jīng)濟(jì)作物，已成為深受消費(fèi)者歡迎的高檔瓜果。目前甜瓜主栽品種在生產(chǎn)中極易受到各種病原菌的侵害，尤其是白粉病病害最為嚴(yán)重。甜瓜白粉病分布范圍廣，致病能力強(qiáng)，已成為世界性的甜瓜主要病害，是甜瓜綠色生產(chǎn)的主要障礙。因此，防治甜瓜抗白粉病是目前甜瓜產(chǎn)業(yè)亟待解決的重要問題。

現(xiàn)階段甜瓜白粉病的防治仍然主要依靠大量噴灑各類化學(xué)藥品。然而，大量化學(xué)試劑的使用不僅嚴(yán)重污染了生態(tài)環(huán)境，對(duì)人類身體健康造成一定威脅，還會(huì)導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生耐藥性，對(duì)防治工作造成更大的困難。因此，防治甜瓜白粉病最經(jīng)濟(jì)有效且環(huán)保的方法就是篩選抗白粉病材料，利用其本身抗性進(jìn)行抗病新品種培育和推廣。

目前，甜瓜育種領(lǐng)域比較常用的方法是雜交育種。然而，傳統(tǒng)雜交育種方法選擇周期長，抗病性鑒定工作繁瑣，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，造成育種成本比較高，嚴(yán)重制約了甜瓜育種進(jìn)度。因此，發(fā)掘與抗白粉病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，利用分子標(biāo)記技術(shù)輔助選擇可提高抗病株系的選擇效率，縮短育種周期，已逐漸成為甜瓜抗白粉病育種的新思路。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明克服現(xiàn)有雜交育種甜瓜抗白粉病品種存在的選育效率低，費(fèi)時(shí)費(fèi)力的技術(shù)缺陷，通過基因型分析和表型鑒定，挖掘了一個(gè)與甜瓜抗白粉病信息緊密連鎖的SSR分子標(biāo)記，并成功應(yīng)用于抗白粉病材料的選擇，有助于進(jìn)一步明確甜瓜抗白粉病信息遺傳規(guī)律，為抗白粉病基因的精細(xì)定位和克隆奠定基礎(chǔ)。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種甜瓜抗白粉病相關(guān)SSR分子標(biāo)記，其特征是，

所述SSR分子標(biāo)記(CMACN213)位于甜瓜2號(hào)染色體上，由一對(duì)引物構(gòu)成，上游引物為：AGAGGTAGATTGTGTTCCG；下游引物為：GGGTAAAGATCATATAAAATC。

本發(fā)明還公開了上述SSR分子標(biāo)記在甜瓜抗白粉病材料篩選及分子標(biāo)記輔助育種中的應(yīng)用。

本發(fā)明還公開了一種甜瓜抗白粉病材料篩選的方法，其特征是，包括以下步驟：

(1)提取待篩選甜瓜抗白粉病材料葉片的基因組DNA；

(2)利用上述的SSR分子標(biāo)記的上下游引物對(duì)甜瓜基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分析：

如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為345bp的DNA片段，則為甜瓜抗白粉病材料；

如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為328bp的DNA片段，則為甜瓜易感白粉病材料；

如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物同時(shí)具有345bp和328bp的DNA片段，則為甜瓜抗白粉病材料和甜瓜易感白粉病材料的復(fù)合材料。

本發(fā)明的有益效果是：

1.本發(fā)明的SSR引物是通過篩選在兩個(gè)親本(抗病和感病)和F2代兩個(gè)極端分離池中存在的多態(tài)性引物，并通過自然群體驗(yàn)證，獲得的與甜瓜抗白粉病基因緊密連鎖的引物。