[發明專利]玉米miR408基因在調控植物耐滲透脅迫及培育抗耐滲透脅迫植物中的應用

有效

• 申請號: 202011428851.8
• 申請日: 2020-12-09
• 公開（公告）號: CN112626112B
• 公開（公告）日: 2021-12-31
• 發明（設計）人: 黃志剛;藺萬煌;劉清;肖浪濤;王若仲;肖英粟
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;A01H6/46;A01H6/20;A01H5/00
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 鄧建輝

本發明公開了玉米miR408基因在調控植物耐滲透脅迫及培育抗耐滲透脅迫植物中的應用。通過轉基因手段得到的含玉米miR408基因的轉基因植株在干旱和鹽等滲透脅迫條件下出現萌發率高、根變長，植株生長較快，因此，miR408基因具有顯著提高植物對干旱和鹽等滲透脅迫耐受性的作用，為將來利用玉米miR408基因對玉米等植物進行遺傳改良，和縮短玉米及其他作物育種年限、提高育種效率提供有效的基因資源。

技術領域

本發明涉及植物基因工程領域，具體涉及玉米miR408基因在調控植物耐滲透脅迫及培育抗耐滲透脅迫植物中的應用。

背景技術

植物在其自然生長過程中，因為不能移動，需要適應復雜多變的環境因素，如干旱脅迫、低溫脅迫、淹水脅迫和高鹽脅迫。一些逆境因子往往是相互聯系、相伴而生，并嚴重影響植物的生長發育、分布以及產量。玉米是世界上分布范圍最廣、種植面積最大的糧食作物之一，幾千年來一直是人類和家畜的重要食物，提高玉米的抗逆性對進一步提高玉米產量具有十分重要的意義。采用傳統育種方法改良玉米周期較長、且優質耐逆育種資源有限而具有較大的不確定。充分利用玉米基因組信息挖掘耐逆相關基因并探索其生物技術育種應用十分必要。

發明內容

本發明旨在至少解決現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明提出玉米miR408基因在調控植物耐滲透脅迫及培育抗耐滲透脅迫植物中的應用，該基因能夠促進植株在滲透脅迫下的萌發與生長。

根據本發明的第一方面實施方式的玉米miR408基因的應用，所述應用為調控植物耐滲透脅迫中的應用。

根據本發明的一些實施方式，所述植物為玉米、擬南芥和/或水稻。

根據本發明的一些實施方式，所述應用為調控植物的抗旱性。

根據本發明的一些實施方式，所述應用為調控植物的抗鹽性。

根據本發明的一些實施方式，所述應用為玉米miR408基因在培育抗耐滲透脅迫植物中的應用。

一種培育抗耐滲透脅迫植物的方法，所述方法包括將上述玉米miR408基因導入目的植物中的步驟。

根據本發明的一些實施方式，所述導入是通過含有上述玉米miR408基因的重組載體實現的。

根據本發明的一些實施方式，所述載體為TSK108和/或pGWB614質粒載體。

根據本發明的一些實施方式，所述目的植物為擬南芥和/或水稻。

一種培育抗耐滲透脅迫擬南芥的方法，該方法包括以下的步驟：

S1、以玉米的DNA為模板，利用PCR方法擴增到上述玉米miR408基因的序列；

S2、將步驟S1所得的玉米miR408基因與TSK108載體進行重組連接反應，將連接產物轉化到大腸桿菌感受態細胞中，通過抗生素篩選，挑取陽性克隆，經PCR反應驗證及測序鑒定正確后，選取正確的菌液提取質粒TSK108-miR408；

S3、將步驟S2提取出的質粒與載體pGWB614質粒重組后，轉化到大腸桿菌感受態細胞中，通過抗生素篩選，挑取陽性克隆，經PCR反應驗證及測序鑒定正確后，選取正確的菌液提取質粒，命名為pGWB614-miR408；

S4、經鑒定正確的陽性質粒pGWB614-miR408，通過農桿菌介導法轉化到擬南芥野生型植株中，篩選轉基因植株。

根據本發明的一些實施方式，步驟S2中所述的抗生素為卡那霉素。

根據本發明的一些實施方式，步驟S2中所述的質粒重組采用In-Fusion克隆方法。

根據本發明的一些實施方式，步驟S3中所述的抗生素為壯觀霉素。