[發明專利]一種產琥珀酸放線桿菌基因工程菌及其構建方法與應用

在審

• 申請號: 202011424552.7
• 申請日: 2020-12-08
• 公開（公告）號: CN112522168A
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發明（設計）人: 鄭璞;陳春梅;陳鵬程;吳丹
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/74;C12N15/60;C12N15/31;C12P7/46;C12R1/01
• 代理公司: 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙) 32257
• 代理人: 王玉仙

1.一種產琥珀酸放線桿菌基因工程菌，其特征在于，所述的產琥珀酸放線桿菌基因工程菌是在產琥珀酸放線桿菌中過表達谷氨酸脫羧酶GadB和氨基酸轉運載體GadC。

2.根據權利要求1所述的產琥珀酸放線桿菌基因工程菌，其特征在于，所述的谷氨酸脫羧酶GadB的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根據權利要求1所述的產琥珀酸放線桿菌基因工程菌，其特征在于，所述的氨基酸轉運載體GadC的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.根據權利要求2所述的產琥珀酸放線桿菌基因工程菌，其特征在于，所述的產琥珀酸放線桿菌基因工程菌中，所述的谷氨酸脫羧酶GadB還包括刪除C末端的11個氨基酸的谷氨酸脫羧酶GadB。

5.根據權利要求2或4所述的產琥珀酸放線桿菌基因工程菌，其特征在于，編碼所述的谷氨酸脫羧酶GadB的基因或編碼刪除C末端的11個氨基酸的谷氨酸脫羧酶GadB的基因，與編碼所述的氨基酸轉運載體GadC的基因之間還包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的RBS片段。

6.根據權利要求1所述的產琥珀酸放線桿菌基因工程菌，其特征在于，編碼所述的谷氨酸脫羧酶GadB的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，編碼所述的氨基酸轉運載體GadC的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

7.根據權利要求1所述的產琥珀酸放線桿菌基因工程菌，其特征在于，所述的產琥珀酸放線桿菌基因工程菌是以產琥珀酸放線桿菌ATCC 55618、產琥珀酸放線桿菌CGMCCNO.1593、產琥珀酸放線桿菌CCTCC NO：M 2012036、產琥珀酸放線桿菌CGMCC NO.1716或產琥珀酸放線桿菌CCTCC M2011399為宿主菌。

8.根據權利要求1所述的產琥珀酸放線桿菌基因工程菌，其特征在于，所述的產琥珀酸放線桿菌基因工程菌是以pLGZ922作為表達載體。

9.一種權利要求1～8任一項所述的產琥珀酸放線桿菌基因工程菌的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)重組質粒構建：將采用RBS連接的谷氨酸脫羧酶基因gadB與氨基酸轉運載體基因gadC，與表達載體pLGZ922連接在一起，獲得過表達載體gadB-gadC-pLGZ922；

(2)基因工程菌制備：將過表達載體gadB-gadC-pLGZ922轉入宿主菌中，篩選獲得所述的產琥珀酸放線桿菌基因工程菌。

10.權利要求1～8任一項所述產琥珀酸放線桿菌基因工程菌在生產琥珀酸中的應用。