[發明專利]用于構建骨質疏松癥克隆豬核供體細胞系的OPG基因編輯系統及其應用有效
| 申請號： | 202011421197.8 | 申請日： | 2020-12-08 |
| 公開（公告）號： | CN112795566B | 公開（公告）日： | 2023-03-17 |
| 發明（設計）人： | 牛冬;汪滔;陶裴裴;曾為俊;王磊;程銳;趙澤英;馬翔 | 申請（專利權）人： | 南京啟真基因工程有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/85;C12N5/10;A01K67/027 |
| 代理公司： | 南京天華專利代理有限責任公司 32218 | 代理人： | 傅婷婷;徐冬濤 |
| 地址： | 211306 江蘇省南京市高淳區經*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 構建 骨質 疏松 克隆 供體 細胞系 opg 基因 編輯 系統 及其 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種用于豬OPG基因編輯的CRISPR/Cas9系統，其特征在于包含Cas9表達載體和gRNA表達載體；所述的Cas9表達載體為質粒全序列如SEQ ID NO.2所示的pU6gRNA-eEF1a-mNLS-hSpCas9-EGFP-PURO載體；所述的gRNA表達載體表達序列如SEQ ID NO：49所示的gRNA；所述的gRNA表達載體以全序列如SEQ ID NO.3所示的pKG-U6gRNA為載體骨架；所述的gRNA表達載體是將SEQ ID NO：41和SEQ ID NO：42所示的單鏈DNA退火得到的具有粘性末端的雙鏈DNA分子克隆到pKG-U6gRNA骨架載體所得；所述的gRNA表達載體和Cas9表達載體的摩爾比為3:1。
2.權利要求1所述的CRISPR/Cas9系統在構建豬OPG基因敲除的豬重組豬成纖維細胞中的應用。
3.一種敲除豬OPG基因的重組豬成纖維細胞，其特征在于由權利要求1所述的CRISPR/Cas9系統共轉染豬原代成纖維細胞經驗證后所得。
4.權利要求3所述的重組細胞在構建OPG基因敲除的克隆豬中的應用。
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