[發(fā)明專利]一種制備三七皂苷Fd和七葉膽苷XIII的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011417616.0
• 申請日: 2020-12-07
• 公開（公告）號: CN114592028A
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 謝海峰;馬素敏;潘萌;胡云嶺;謝期林
• 申請（專利權(quán)）人: 成都普睿法藥物研發(fā)有限公司
• 主分類號: C12P33/20
• 分類號: C12P33/20
• 代理公司: 成都希盛知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51226
• 代理人: 張徭堯;柯海軍

本發(fā)明涉及一種制備三七皂苷Fd和七葉膽苷XIII的方法，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供一種成本較低的制備三七皂苷Fd和七葉膽苷XIII的方法。該方法包括如下步驟：a、調(diào)節(jié)人參皂苷Rb3溶液的pH值為4.5～5.0，然后加入纖維素酶進(jìn)行水解，得到水解液，其中，人參皂苷Rb3溶液的濃度為1～100g/L，纖維素酶的濃度為1～50000U/mL；b、將水解液分離純化，得到三七皂苷Fd和七葉膽苷XIII。本發(fā)明方法工藝簡單，成本較低，為三七皂苷Fd和七葉膽苷XIII的制備提供了一種新的途徑，具有廣闊的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種制備三七皂苷Fd和七葉膽苷XIII的方法，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

三七葉為掌狀復(fù)葉，3～4片輪生莖頂，葉柄長5～11.5cm，表面無毛；托葉線形，簇生，長不及2cm。栽培主產(chǎn)區(qū)在云南的文山、硯山、廣南、丘北及廣西的百色，產(chǎn)量大，質(zhì)量優(yōu)，名滿中外。

《本草綱目》稱三七莖葉“治折傷、跌撲出血，敷之即止，青腫經(jīng)夜即散余功同根”。近年來的研究，表明三七的莖葉亦可供藥用，且毒副作用小。三七葉中含有多種皂苷成分，現(xiàn)已報道的有20多種。藥理研究表明三七莖葉的活性成分三七莖葉總皂苷，對血液系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和代謝系統(tǒng)作用與三七根皂苷相似。三七皂苷Fd，又稱絞股藍(lán)皂苷IX、七葉膽苷IX，是從三七提取的一種純化合物。動物實驗表明，三七皂苷Fd可以抑制由促炎介質(zhì)引起的反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞增生，進(jìn)而改善認(rèn)真障礙。這一新發(fā)現(xiàn)為三七皂苷Fd在減輕星形膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥中的臨床應(yīng)用鋪平道路。七葉膽苷XIII，又稱絞股藍(lán)皂苷M、人參皂苷Mx，七葉膽苷XIII具有出色的抗氧化能力，可通過增強Nrf2的核積累來提高細(xì)胞保護(hù)性抗氧化劑的表達(dá)；減少了UVB誘導(dǎo)的抑制NF-κB表達(dá)，從而減少過度釋放的炎性細(xì)胞因子。七葉膽苷XIII是有前途的天然化妝品成分，用于預(yù)防和治療UVB引起的皮膚損傷。

市場上三七莖葉主要產(chǎn)品是茶沖劑、化妝品、營養(yǎng)品等，均以其粗提物為原料，資源利用度低，產(chǎn)品技術(shù)層次不高。稀有人參皂苷的藥理活性越來越受到關(guān)注，但天然植物中含量極低、來源受限、難于分離。實驗測定三七莖葉提取物中三七皂苷Fd和七葉膽苷XIII含量＜0.5％。酶轉(zhuǎn)化法可以通過水解側(cè)鏈糖基制備稀有人參皂苷，酶法水解三七莖葉中人參皂苷Rb3制備三七皂苷Fd和七葉膽苷XIII不僅生產(chǎn)效率高，符合國家低能耗、低污染、高效率的政策要求，且有助于植物資源綜合利用。

目前，酶法水解人參皂苷均采用特異性的酶，比如，申請?zhí)枮?02010653370.0的中國發(fā)明專利公開了一種β-葡萄糖苷酶、其編碼基因及其表達(dá)和應(yīng)用，采用特定的氨基酸序列酶，轉(zhuǎn)化人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb2等天然化合物在適宜條件下進(jìn)行轉(zhuǎn)化，去除人參皂苷C20上連接的葡萄糖基。申請?zhí)枮?01911117100.1的中國發(fā)明專利公開了一種重組β-葡萄糖苷酶CB-3B及其在生產(chǎn)人參皂苷Rg3中的應(yīng)用。申請?zhí)枮?01510036363.5的中國發(fā)明專利公開了一種重組糖苷水解酶用于生物轉(zhuǎn)化制備人參二醇型皂苷的工藝。

可見，水解人參皂苷的酶普遍采用特定的基因工程方法制備，其成本較高，且并未發(fā)現(xiàn)水解人參皂苷Rb3的酶。

發(fā)明內(nèi)容

針對以上缺陷，本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供一種成本較低的制備三七皂苷Fd和七葉膽苷XIII的方法。

本發(fā)明制備三七皂苷Fd和七葉膽苷XIII的方法，其特征在于，包括以下步驟：

a、水解：調(diào)節(jié)人參皂苷Rb3溶液的pH值為4.5～5.0，然后加入纖維素酶進(jìn)行水解，得到水解液，其中，人參皂苷Rb3溶液的濃度為1～100g/L，纖維素酶的濃度為1～50000U/mL；

b、分離純化：將水解液分離純化，得到三七皂苷Fd和七葉膽苷XIII。

在本發(fā)明的一個實施方式中，a步驟中，人參皂苷Rb3溶液的濃度為2～50g/L。