[發(fā)明專利]一種γδT細(xì)胞的制備和擴增方法以及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011411314.2
• 申請日: 2020-12-03
• 公開（公告）號: CN114591907A
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱煥章;姜正濤;梁玥;梁卉彤
• 申請（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N5/10;C12N15/867;C12N15/62;A61K39/00;A61K35/17;A61P31/18;A61P35/00
• 代理公司: 上海元一成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.一種體外擴增γδT細(xì)胞的方法，其特征在于，所述的方法包括：

獲取或者分離γδT細(xì)胞，所述γδT細(xì)胞使用磁珠分離；和/或

在含有唑來膦酸、人重組白細(xì)胞介素2和人重組白細(xì)胞介素7的培養(yǎng)介質(zhì)中擴增所述的γδT細(xì)胞，其中活擴增存在唑來膦酸，濃度為0.5-2.0μM。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的IL-2的濃度為5ng/ml-10ng/ml。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，IL-7濃度為0.5ng/ml-5ng/ml。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到0.5-2.0x10⁶個/mL時，1：1-1：4傳代。

5.權(quán)利要求1-4中任意一項所述的方法，其特征在于，所述的方法還包括：

(1)使用嵌合型抗原受體的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞獲得慢病毒載體；

(2)使用步驟(1)獲得的慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)γδT淋巴細(xì)胞；

所述的嵌合型抗原受體包括：靶向特定適應(yīng)癥抗原的單鏈抗體ScFv、IgG4鉸鏈區(qū)、CD8跨膜區(qū)、4-1BB；

所述的ScFv、IgG4鉸鏈區(qū)、CD8跨膜區(qū)、4-1BB的氨基酸序列分別如SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7所示；或者

所述的ScFv、IgG4鉸鏈區(qū)、CD8跨膜區(qū)、4-1BB的核酸序列分別如SEQ ID NO.2、SEQ IDNO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8所示。

6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述的步驟(2)包括：

在γδT細(xì)胞的培養(yǎng)環(huán)境中加入重組有所述的嵌合型抗原受體表達(dá)載體的慢病毒；

慢病毒感染24小時后換液。

7.一種γδT細(xì)胞，其特征在于，所述的γδT細(xì)胞使用權(quán)利要求1所述的方法制備。

8.如權(quán)利要求7所述的γδT細(xì)胞，其特征在于，所述的γδT細(xì)胞使用權(quán)利要求5所述的嵌合型抗原受體進(jìn)行基因修飾。

9.權(quán)利要求7或者8所述的γδT細(xì)胞的應(yīng)用，其特征在于，所述基因修飾的γδT淋巴細(xì)胞在制備抗腫瘤或者抗艾滋病的活細(xì)胞藥物中的應(yīng)用。

10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，其中所述的腫瘤選自肺癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌、胃癌、直結(jié)腸癌、白血病或者卵巢癌。