[發明專利]一種基于煙葉差異代謝物含量快速檢測煙葉成熟度的方法及裝置

有效

• 申請號: 202011404578.5
• 申請日: 2020-12-05
• 公開（公告）號: CN112684029B
• 公開（公告）日: 2022-11-04
• 發明（設計）人: 鄒聰明;藺忠龍;陳頤;何鮮;顧開元;張志敏;蘇家恩;袁坤;楊學書;楊雪彪;隋學藝;劉芮;王濤;鄭東方
• 申請（專利權）人: 云南省煙草農業科學研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N21/3563
• 代理公司: 昆明知道專利事務所(特殊普通合伙企業) 53116
• 代理人: 姜開俠;姜開遠

1.一種基于煙葉差異代謝物含量的快速檢測煙葉成熟度的方法，其特征在于，煙葉差異代謝物為尼古丁氮氧化合物和降煙堿，具體步驟如下：

A、煙葉代謝提取物提取：在低溫液氮環境下將煙葉磨成粉末后過30-50目篩得到煙葉樣品，取100mg煙葉樣品用體積比為7:3-8:2的甲醇/水溶液1-1.5mL進行超聲提取得提取液，將提取液離心過濾后干燥即得待測樣品；

B、將待測樣品溶于300μL萃取溶劑中，利用LC-MS檢測方法對煙葉樣品中差異代謝物尼古丁氮氧化合物和降煙堿的離子流強度進行檢測；液相色譜分離條件為進樣量1.5-2μL，柱溫40℃，100nm×2.1mm，1.7μm的ACQUITY UPLC BEH C18超高效液相色譜柱為固定相，用于分析的流動相組成如下：流動相A為含有0.1%甲酸的乙腈溶液；流動相B為含有0.1%甲酸的水溶液，梯度洗脫程序為95%B，0.01-1.0min；90%B，1-10min；80%B，10-20min；65%B，20-30min；58%B，30-33min；50%B，33-35min；20%B，35-40min；0%B，40-48min，流速為0.4mL/min，總洗脫時間為48分鐘；質譜儀參數為：質量范圍為50-1,000m/z，CDL溫度為200°C，加熱塊溫度設為200°C，霧化氣體N₂保持在流速為1.5L/min，干燥氣體N₂壓力100kPa，離子阱壓力1.8×10^-5kPa，離子累積時間60ms；檢測器電壓設定為1.62kV，RP真空度設為85.0-92.0Pa，IT真空度設為1.8×10^-2Pa，TOF真空度設為1.3×10^-4Pa；在進行MS/MS分析時，以1.5L/min的流速，并在100KPa壓力下施加干燥氣體N₂，碰撞能量設置為50%；

C、煙葉成熟度判斷：當煙葉尼古丁氮氧化合物離子流強度在2.3~3.2×10⁶，降煙堿離子流強度在2.0~3.8×10⁷范圍內時，判斷煙葉為適熟煙葉；當煙葉尼古丁氮氧化合物離子流強度大于3.2×10⁶，降煙堿離子流強度小于2.0×10⁷時，判斷煙葉為欠熟；當尼古丁氮氧化合物離子流強度小于2.3×10⁶，降煙堿離子流強度大于3.8×10⁷時，判斷煙葉為過熟。