[發(fā)明專利]一種同時測定血漿中維生素A、維生素E和25-羥基維生素D的方法

在審

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• 申請日: 2020-12-02
• 公開（公告）號: CN112557539A
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發(fā)明（設計）人: 鐘志松;焦青;賈永娟;萬哲見;劉世文
• 申請（專利權）人: 成都和合醫(yī)學檢驗所有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 成都熠邦鼎立專利代理有限公司 51263
• 代理人: 寧波

本發(fā)明提供了一種同時測定血漿中維生素A、維生素E和25?羥基維生素D的方法，采用液相色譜串聯(lián)質譜法進行檢測,檢測的色譜條件如下：色譜柱：F5色譜柱；流動相：流動相A為含體積分數(shù)為0.1%甲酸和1mM甲酸銨的甲醇溶液；B為體積分數(shù)為0.1%的甲酸水溶液；梯度洗脫程序為：0?2.7min，78%A；2.71?4.00min，97%A，4.01?4.8min，78%A。本發(fā)明方法高效準確、線性范圍廣、重現(xiàn)性良好，而且樣本使用量少、患者依從性好、檢測成本低，具有良好的臨床應用前景。

技術領域

本發(fā)明屬于分析檢測領域，具體涉及一種同時測定血漿中維生素A、維生素E和25-羥基維生素D的方法。

背景技術

維生素又名維他命，是維持人體生命活動必須的微量營養(yǎng)物質。維生素種類多、性質差異懸殊，按溶解性可分為脂溶性和水溶性兩大類，脂溶性維生素包括維生素A、D、E等，其缺乏會導致營養(yǎng)性疾病的發(fā)生。

例如，維生素A是構成視覺細胞中感受弱光的視紫紅質的組成成分，缺乏時影響暗適應能力，會導致夜盲癥、眼部炎癥等。維生素D能夠調節(jié)人體的鈣、磷體內平衡，缺乏會導致少兒佝僂病和成年人的軟骨病。25羥基維生素D是維生素D在體內的主要存在形式，其中，3-epi-25-(OH)-VD3是 25(OH)VD3的同分異構體，但不具有生理活性，檢測過程中若不能有效分離該物質，將造成25(OH)VD3的檢測結果偏高。維生素E具有抗氧化、免疫調節(jié)、控制炎癥、基因表達和認知能力的調控等作用,缺乏會導致代謝失常、免疫力下降、新生兒溶血性貧血等。

脂溶性維生素的傳統(tǒng)檢測方法有比色法、紫外失活分光光度法、熒光法及微生物法等。這些方法只能測定某一種維生素的含量，操作步驟復雜，血漿樣本量大,且結果不穩(wěn)定,干擾因素多,因此需要建立一種靈敏、準確、快速的分析方法。

現(xiàn)有技術中，有使用液相色譜-串聯(lián)質譜(LS-MS/MS)同時測定多種脂溶性維生素的報道，如李金蓉等，液質聯(lián)用定量血清中維生素D、A、E的方法，國際檢驗醫(yī)學雜志，2019,40:876-881報道了一種定量檢測血清中脂溶性維生素的方法；公開號為CN105158394A的專利申請公開了一種同時檢測血清中多種脂溶性維生素的方法。這些方法均未見有效分離3-epi-25-(OH)-VD3，而且存在血清使用量較多，不利于嬰幼兒采血分析；或檢測的維生素線性范圍不夠寬，若患者體內濃度過低，則難以準確檢測等問題。

因此，急需開發(fā)準確、低樣本量的脂溶性維生素檢測方法。

發(fā)明內容

為了克服上述現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供了一種利用高效液相色譜串聯(lián)質譜法，同時測定血漿中維生素A、維生素E和25-羥基維生素D的方法。

本發(fā)明提供了一種同時測定血漿中多種脂溶性維生素的方法，采用液相色譜串聯(lián)質譜法進行檢測，檢測的色譜條件如下：

色譜柱：F5色譜柱；

流動相：流動相A為含體積分數(shù)為0.1％甲酸和1mM甲酸銨的甲醇溶液； B為體積分數(shù)為0.1％的甲酸水溶液；

梯度洗脫程序為：0-2.7min，78％A；2.71-4.00min，97％A，4.01-4.8min， 78％A。

其中，所述脂溶性維生素為維生素A、維生素E、25-羥基維生素D2、25- 羥基維生素D3和/或3-epi-25-羥基維生素D3。

其中，所述色譜柱的規(guī)格為：長度50mm，內徑3mm，填料粒徑2.6μm；優(yōu)選的色譜柱型號為Phenomenex Kinetex F5色譜柱。

其中，質譜條件為：離子源：ESI；霧化氣流量：3L/min；加熱氣流量： 5L/min；接口溫度：350℃；DL溫度：150℃；加熱塊溫度：450℃；干燥氣流量：15L/min。

其中，操作步驟如下：