[發明專利]一種廣譜熒光底物及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011387973.7
• 申請日: 2020-12-01
• 公開（公告）號: CN112457250A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 葛廣波;周啟航;張鳳;涂東珠
• 申請（專利權）人: 上海中醫藥大學
• 主分類號: C07D221/14
• 分類號: C07D221/14;C09K11/06;C12Q1/48;G01N21/64
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 周瓊

本發明提供了一種尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉移酶的廣譜熒光底物及其制備方法和應用，具體為鹵代苯乙基?4?羥基?1,8?萘酰亞胺衍生物。該類底物可被多種UGT酶催化生成相應的單葡萄糖醛酸產物，且產物可在360nm熒光激發條件下產生明亮的熒光發射信號。以該類廣譜熒光底物，以重組表達的UGT酶為酶源，可同步實現待測化合物對十種人源UGT酶的抑制/激活能力的篩選與評價。廣譜熒光底物及其熒光產物的檢測可借助液相?熒光檢測系統(LC?FD)及熒光微孔板檢測體系，具有檢測通量高、操作簡便、廉價高效等優點，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種廣譜熒光底物，尤其涉及一種尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉移酶(UGT)的廣譜熒光底物及其制備方法，及其在UGT酶抑制劑/激活劑篩選與評價中的應用，以及在高通量篩選及評價UGT酶抑制劑/激活劑的應用。

背景技術

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉移酶(UGT)超家族是機體內重要的Ⅱ相代謝酶，其通過催化化合物與輔因子尿苷二磷酸葡萄糖醛酸(UDPGA)結合，從而增加底物的親水性，使化合物能更有效地從尿液或膽汁中排出體外，這是機體的一個重要的解毒過程。哺乳動物的UGT可分為4個家族：UGT1,UGT2,UGT3和UGT8。其中參與藥物結合代謝的多為UGT1A和UGT2B亞家族的成員。

作為機體最重要的II相代謝酶，UGT酶在各種異源生物(如治療藥物及其Ⅰ相代謝產物，食品化學成分或環境毒素)的代謝清除和解毒中發揮了關鍵作用。除異源物代謝外，UGT酶還參與許多內源性物質(如膽紅素，類固醇和膽汁酸)的葡萄糖醛酸化代謝。當UGT酶出現功能障礙或被強效抑制后則可能會引發內源物代謝障礙及藥物/草藥相互作用(DDI/HDI)，給人類健康帶來不良影響。反之，部分UGT酶(如UGT1A1)的激活劑可加速膽紅素等毒物的代謝清除，進而緩解疾病的發生發展進程。因此，業界一直期望能開發出UGT酶抑制劑/激活劑的高效篩選與評價方法。

由于UGT酶氨基酸序列的高度一致導致其底物譜高度重疊，因此UGT酶的特異性探針底物報道極少。到目前為止，僅有少數UGT亞型酶(包括UGT1A1，UGT1A4，UGT1A9和UGT2B7)具有公認的特異性底物。而對于其他UGT亞型酶的活性檢測，只能依靠傳統非熒光底物4-甲基傘形酮(4-MU)，其檢測通量低，樣本前處理及檢測過程操作繁瑣復雜，無法同步開展目標物對多種UGT亞型酶抑制/激活能力的規模化篩選與評價。因此，設計研發UGT酶廣譜型熒光探針底物及其匹配的UGT抑制劑/激活劑高通量篩選與評價方法對于UGT介導的藥物相互作用評價具有重要意義。

發明內容

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一類尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉移酶(UGTs)的廣譜熒光底物及其制備方法，以及其在UGT酶抑制劑/激活劑篩選與評價中的應用。

本發明提出一種廣譜熒光底物，該廣譜熒光底物為具有如下結構通式(Ⅰ)的鹵代苯乙基-4-羥基1,8-萘酰亞胺衍生物中的一種：

其中，R₁選自F、Cl、Br或CF₃中的一種。

本發明所述的廣譜熒光底物的制備方法，步驟如下：

⑴將4-溴-1、8-萘酸酐和苯乙胺衍生物在乙醇中溶解混勻，反應并回流8小時后冷卻至室溫，倒入冰水中，分離出沉淀物，用水洗滌、干燥；

其中，4-溴-1、8-萘酸酐和苯乙胺衍生物的摩爾比為：1∶1.2；

其中，步驟⑴所述的苯乙胺衍生物為對氟苯乙胺、對溴苯乙胺、對氯苯乙胺和對三氟甲基苯乙胺中的一種；

⑵將步驟⑴所得產物和碳酸鉀在甲醇中混合回流10小時，冷卻至室溫后，加入濃鹽酸將pH值調節至1-2，過濾沉淀物，用水洗滌并干燥；

其中，步驟⑴所得產物和碳酸鉀的摩爾比為：1∶9；