[發明專利]人非小細胞肺癌核酸適配體截短體及其應用

有效

• 申請號: 202011371855.7
• 申請日: 2020-11-30
• 公開（公告）號: CN112553209B
• 公開（公告）日: 2023-03-24
• 發明（設計）人: 王含璐;蔣永平
• 申請（專利權）人: 蘇州方舟生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/574;G01N33/533;A61K31/7088;A61P35/00
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 肖明芳

本發明公開一種人非小細胞肺癌核酸適配體截短體，其是基于本發明在前期活體篩選獲得的人非小細胞肺癌靶向及抑瘤雙特異性核酸適配體的基礎上，進一步簡化了核酸適配體的序列，將原先含有83個核苷酸的序列進一步縮短到69個核苷酸，并且仍然保持了對人非小細胞肺癌極高的特異性及親和力，以及對于腫瘤細胞增殖的抑制作用。本發明得到的人非小細胞肺癌核酸適配體截短體長度更短、分子量更小，其片段經過5’端PEG和NH₂修飾，其相較長鏈的RNA適配體相比，更易于進行大規?；瘜W合成，成本低；同時擁有穩定性好，易于保存和修飾等優點。

技術領域

本發明屬于生物醫學領域，具體地涉及人非小細胞肺癌核酸適配體截短體的序列。

背景技術

癌癥已成為世界人口的主要死亡原因之一，據統計，全國每分鐘就有7人死于癌癥。其中肺癌是全世界及全國發病率和死亡率第一的惡性疾病。目前，手術切除及傳統的化療為臨床常用的治療手段，但是手術及化療的高復發率和副作用一直是臨床上亟待解決的問題，臨床上迫切需要采取新的方法和手段治療肺癌患者，提高患者的生存期，開發能特異性識別腫瘤組織而非正常組織的靶向診斷或治療藥物成為抗癌藥物研發中的重中之重。

適配體(aptamer)是可以折疊成三維結構，通過空間構型與靶分子特異性結合的一段單鏈寡核苷酸序列(ssDNA，RNA或修飾后的RNA)。由于適配體具有與靶標結合的特異性，其中的一些適配體還可以通過與靶標的結合，抑制靶物質的功能，阻斷細胞中的信號通路，具有被開發為特異性的抑制靶標的核酸藥物的價值。

然而，傳統的體內外篩選獲得的適配體長度較長，不適合大規模的體外合成及修飾，因此，進一步優化核酸適配體序列長度，獲得分子量小、易于合成和修飾，并且特異性、親和力及生理功能俱佳的核酸適配體截短體，更有利于推動核酸適配體藥物進入臨床。

發明內容

發明目的：為解決現有技術中存在的技術問題，本發明提出一種序列更短、分子量子量更小的人非小細胞肺癌核酸適配體截短體。

本發明在前期活體-SELEX獲得的人非小細胞肺癌特異性適配體的基礎上，進一步優化獲得長度更短、分子量更小的核酸適配體截短體，獲得的適配體截短體不僅仍然具有與人非小細胞肺癌H460細胞特異性結合的高親和力，而且可以特異性地抑制人非小細胞肺癌細胞的增殖，有望實現腫瘤的靶向治療。

具體地，所述核酸適配體截短體的核苷酸序列如SEQ NO.1所示: GGGAGAGAACAAUGACCUGCGGUGCCAAGCCGUCGGGUUAUGUUGAUCUCCU CAAGGACGAGUGCAUUG(SEQ NO.1)。

該截短體的獲得，是基于本發明在前期活體篩選獲得的人非小細胞肺癌靶向及抑瘤雙特異性核酸適配體(詳見CN106032534B)的基礎上，進一步簡化了核酸適配體的序列，將原先含有83個核苷酸的序列進一步縮短到69個核苷酸，并且仍然保持了對人非小細胞肺癌極高的特異性及親和力，以及對于腫瘤細胞增殖的抑制作用。這不僅大大提高了寡核苷酸序列在體外化學合成的可能性及簡便性，同時通過化學合成，有利于提高核酸序列的純度和均一性，有利于大大縮短基于適配體的靶向核酸藥物進入臨床前試驗期，提高臨床應用的成功率。

進一步地，本發明對該核酸適配體截短體進行5’端PEG和NH₂修飾，其相較長鏈的RNA適配體相比，更易于進行大規?；瘜W合成，成本低。

本發明進一步提出了上述核酸適配體截短體或修飾后的截短體在制備特異性診斷人非小細胞肺癌的診斷試劑上的應用。

具體地，本發明提出了一種特異性診斷人非小細胞肺癌的診斷試劑，所述的診斷試劑包括上述核酸適配體截短體和與之相連的可檢測標記物。

所述的可檢測標記物為熒光標記。

優選地，所述熒光標記為Cy3、Cy5、熒光素、FITC、熒光納米微球、Alexa Fluor 染料中的任意一種。