[發明專利]一種皮下注射人免疫球蛋白的制備方法

有效

• 申請號: 202011369121.5
• 申請日: 2020-11-30
• 公開（公告）號: CN112375141B
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發明（設計）人: 蘭學淵;張庭喜;蔣炳姣;孔維權;呂紹玉;李秋;屈信顏;孫文
• 申請（專利權）人: 廣西冠峰生物制品有限公司
• 主分類號: C07K16/06
• 分類號: C07K16/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/18
• 代理公司: 南寧東之智專利代理有限公司 45128
• 代理人: 杜啟杰;汪治興

本發明一種皮下注射人免疫球蛋白的制備方法，在FIII/FI+III分離步驟用磷酸鹽進行離子強度和pH調節，在pH4.6~4.9進行選擇性溶解，在pH5.0~5.4進行雜蛋白的沉淀，可以有效去除抗A抗B抗體，降低制品中抗A抗B抗體滴度；在第二步陰離子交換層析中選擇的pH為6.5~7.5，高于抗A抗B抗體等電點，抗A抗B抗體攜帶負電荷，被陰離子交換凝膠吸附，進一步去除抗A抗B抗體，從而降低皮下注射人免疫球蛋白導致的溶血反應的風險；選擇在pH5.0~5.4進行雜蛋白沉淀，降低了促凝血活性物質，有效降低了皮下注射高濃度人免疫球蛋白使用后導致的血栓栓塞事件發生的風險；采用兩步陰離子交換層析進一步純化，可提高產品純度，降低IgA和纖維蛋白溶解酶含量，降低不良反應發生率，提高產品長期穩定性。

技術領域

本發明涉及免疫球蛋白的制備方法技術領域，具體涉及一種皮下注射人免疫球蛋白的制備方法。

背景技術

1952年人免疫球蛋白首次用于治療各種免疫缺陷病，用藥途徑為肌肉或皮下。1980s以保持IgG分子天然結構完整性、具有完整的生物學活性為特征的第三代IVIG上市，蛋白質含量通常為5%，1990s國際上開發出高濃度皮下注射人免疫球蛋白。

人免疫球蛋白在多種疾病的治療中有著不可替代的重要作用，全球范圍內對人免疫球蛋白的需求增長巨大。與靜注人免疫球蛋白相比皮下注射人免疫球蛋白具有相當優勢，如注射后病人血液中IgG濃度更穩定、具有更好的耐受性、不良反應發生率更低、長期使用成本更低、使用過程中不需要密切進行監視因而病人可在家中自行使用，可以減少住院時間，提高生活質量，節約社會資源。

臨床上皮下注射人免疫球蛋白用于原發性免疫缺陷（PID）、伴有繼發性低丙種球蛋白血癥和反復感染的骨髓瘤或慢性淋巴細胞白血病、繼發性免疫缺陷(SID)、慢性炎癥性脫髓鞘性多發性神經病(CIDP)、多灶性運動神經病(MMN)、特發性炎癥性肌病，包括多發性肌炎(PM)、皮肌炎(DM)、器官移植手術后感染的預防。

現有高濃度皮下注射免疫球蛋白工藝通常以CHONFII+III/FI+II+III或KISTLER-NISTCHMANN沉淀A為原料，采用辛酸沉淀或PEG沉淀技術，然后經層析純化制備。這些制備工藝舍棄了傳統低溫乙醇工藝FIII/FI+III分離步驟，而FIII/FI+III沉淀是免疫球蛋白分離純化過程中的重要工藝步驟，是去除同種凝集素降低溶血反應、去除FXI/FXIa降低制品促凝血活性從而提高產品安全性，降低不良反應發生率的關鍵步驟，因此采用辛酸沉淀或PEG沉淀所制備的產品通常含有更高的抗A抗B滴度和FXIa活性，溶血性貧血和血栓栓塞等不良反應發生率更高。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的是提供一種工藝簡單、安全性高的皮下注射人免疫球蛋白的制備方法。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：一種皮下注射人免疫球蛋白的制備方法，包括以下步驟：

（1）FII+III/FI+II+III分離：在FI上清液或血漿中添加醋酸鹽緩沖液，將pH調節至5.8～6.2；再加入預冷的體積分數為95%的乙醇至乙醇的體積達混合液體積的18～22%，同時將混合液溫度降至-6～-4℃，沉淀老化，得到第一靜置液；在-6～-4℃條件下離心所述的第一靜置液，得到離心分離的沉淀；

（2）FIII/FI+III分離：用10～15倍0～5℃的注射用水溶解所述的離心分離的沉淀，再加入磷酸鹽緩沖液調節pH至4.6～4.9，反應1小時后，用磷酸鹽緩沖液調節pH至5.0～5.4，反應1小時后，用0～5℃注射用水調節電導率至0.6～1.6ms/cm，加入預冷的體積分數為95%的乙醇至乙醇的體積達混合液體積的10～12%，同時將混合液溫度降低至-5～-3℃沉淀，得到沉淀的混合液；在-5～-3℃條件下離心分離沉淀的混合液，收集FIII/FI+III上清液；