[發明專利]一種誘導香蕉理想突變密度的誘變方法在審

申請號：	202011366774.8	申請日：	2020-11-30
公開（公告）號：	CN112369323A	公開（公告）日：	2021-02-19
發明（設計）人：	李敬陽;許竹葉;魏卿;王安邦;李羽佳;王笑一;許奕	申請（專利權）人：	中國熱帶農業科學院海口實驗站
主分類號：	A01H1/06	分類號：	A01H1/06
代理公司：	廣州三環專利商標代理有限公司 44202	代理人：	王美燕
地址：	570100 ***	國省代碼：	海南;46
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種誘導香蕉理想突變密度誘變方法
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【說明書】：

本發明提供一種誘導香蕉理想突變密度的誘變方法，包括以下步驟：EMS誘變劑的配制、香蕉的處理、洗滌處理、增殖培養、輻射處理，本發明經科學配制誘變劑，在MS培養基的基礎上，添加6?芐基氨基嘌呤(BAP)、腺嘌呤，相互協調使用，調節誘變劑配比，再經特定的誘變方法，調節誘變劑培養和增殖培養基培養環境，使用He?Ne激光輻射處理，在低溫下用低濃度長時間處理，刺激植物生長，促進不定芽對培養基的吸收，高效識別突變基因，從基因組中的中等到高的突變密度，減少實現基因組覆蓋所需的突變，提高香蕉的誘變效率，有效增加變異類型。

技術領域

本發明涉及植物多倍體誘變育技術種植領域，特別涉及一種誘導香蕉理想突變密度的誘變方法。

背景技術

香蕉是典型的熱帶亞熱帶果樹，廣泛分布于熱帶和南亞熱帶地區。我國是世界香蕉主產國之一，種植區域分布于廣東、海南、廣西、福建、云南及臺灣等省區。目前，香蕉植物體構建突變體傳統方法是自發突變和理化誘變，但自發突變的頻率較低，很難進行系統收集，物理誘變易獲突變，且多為多點突變，但由于無法控制點突變的數量，增加功能基因的難度，而大多使用高濃度的化學誘變劑對植株進行誘變，對植物體來說生理損傷也相對地增高,，往往影響植株的成活率。

本發明旨在高效識別突變基因，從基因組中的中等到高的突變密度，減少實現基因組覆蓋所需的突變，提高香蕉的誘變效率，有效增加變異類型。

發明內容

鑒于此，本發明提出一種誘導香蕉理想突變密度的誘變方法，解決上述問題。

本發明的技術方案是這樣實現的：一種誘導香蕉理想突變密度的誘變方法：包括以下步驟：

S1、EMS誘變劑的配制：MS培養基、6-芐基氨基嘌呤(BAP)1.0～5.0mg/L、腺嘌呤0.2～1.5mg/L、瓊脂糖2.0～4.0g/L、蔗糖20～40g/L；

S2、香蕉的處理：使用手術刀切割下單個獨立的芽，放入上述EMS誘變劑的三角瓶中，在旋轉搖床中以100～150rpm、20～30℃振蕩浸泡培養4～24h，

S3、洗滌處理：上述步驟處理后，在蒸餾水中沖洗2～5次莖尖；

S4、增殖培養：每隔20～30天將誘變后的不定芽轉接到增殖培養基中，進行4～8個循環后，轉入含有0.5～3.0g/L吲哚丁酸IBA、2.0～4.0g/L瓊脂糖和20～40g/L蔗糖的MS基礎培養基中；

S5、輻射處理：將S4處理中的不定芽經He-Ne激光輻射處理，波長為700～900nm，獲得誘變處理植物體。

進一步的，所述S1中的蔗糖pH為4.0～6.0。

進一步的，所述S1中EMS誘變劑的配制：MS培養基、6-芐基氨基嘌呤(BAP)3.0mg/L、腺嘌呤1.0mg/L、瓊脂糖3.0g/L、蔗糖30g/L。

進一步的，所述S1中EMS誘變劑濃度0.4～1.6％。