[發明專利]一種河北梨組織培養快速繁殖方法

在審

• 申請號: 202011365730.3
• 申請日: 2020-11-28
• 公開（公告）號: CN112262770A
• 公開（公告）日: 2021-01-26
• 發明（設計）人: 張軍;侯佳琪;董研;王進茂;楊敏生;李龍飛;冀明輝;高麗娟
• 申請（專利權）人: 河北農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G17/00;A01G31/00;A01G24/28;A01G24/15;A01G24/10;A01G24/12
• 代理公司: 深圳至誠化育知識產權代理事務所(普通合伙) 44728
• 代理人: 劉英

本發明涉及河北梨培育技術領域，尤其為一種河北梨組織培養快速繁殖方法，包括如下操作步驟：步驟一：試驗材料選擇；步驟二：材料的處理；步驟三：基本培養基的篩選：步驟四：細胞分裂素對不定芽生長的影響實驗；步驟五：生長素對芽增殖的影響實驗；步驟六：適宜組培苗生根的培養基的選擇；步驟七：生根苗移栽；步驟八：數據處理及結果分析，本發明通過對影響河北梨生長的多種培養基及生長因素的篩選實驗，最終篩選出最適合河北梨生長的培養基條件，從而滿足河北梨的快速繁殖。

技術領域

本發明及河北梨培育技術領域，具體為一種河北梨組織培養快速繁殖方法。

背景技術

河北梨，薔薇科梨屬落葉喬木，高6～8米；花期4～5月；果期9～10月。河北梨產自河北燕山山區，野生或栽培，播種或分蘗繁殖，當地長期作為山地梨砧木使用。河北梨是我國120種極小種群物種之一，在日益頻繁的人為干擾破壞下，梨屬野生資源的生存正受到嚴重威脅，河北梨數量大幅度減少，已被列為極小種群野生物種。河北梨作為瀕危野生樹種，極具開發價值，具有廣闊的研究空間和巨大的潛在利用價值，是近年來發現的珍貴種質資源，野生植株數量極少，為了保存河北梨的種質資源以及進行更多深入研究，探索河北梨的繁殖技術具有重要意義。常規的育苗方法周期長、成活率相對較低，原因在于適宜河北梨生長的培養基條件不夠理想，無法實現河北梨的快速繁殖。鑒于此，我們提出一種河北梨組織培養快速繁殖方法。

發明內容

為了彌補以上不足，本發明提供了一種河北梨組織培養快速繁殖方法。

本發明的技術方案是：

一種河北梨組織培養快速繁殖方法，包括如下操作步驟：

步驟一：試驗材料選擇；

步驟二：材料的處理；

步驟三：基本培養基的篩選；

步驟四：細胞分裂素對不定芽生長的影響實驗；

步驟五：生長素對芽增殖的影響實驗；

步驟六：適宜組培苗生根的培養基的選擇；

步驟七：生根苗移栽；

步驟八：數據處理及結果分析。

作為本發明的優選技術方案，步驟一的具體操作為：從秦皇島昌黎選擇九月份生產的典型野生河北梨植株，采集果實并剝取種子，進行保存。

作為本發明的優選技術方案，步驟二的具體操作為：對所選材料進行接種處理，接種時，先將河北梨種子剝去種皮，用自來水清洗后，隨后放置超凈工作臺上乙醇浸泡30s，最后用滅菌水清洗3次，再放入20％的84消毒液中消毒16分鐘，消毒的整個過程始終保持搖晃動作，從而更加充分地消毒，消毒完成后用無菌水沖洗4～5次，去掉種皮后接入不添加任何激素的MS培養基中使其萌發，當種子發芽至小苗狀態時，把莖段切成0.5～1.0cm長小段，接至含有不同激素及濃度的固體培養基進行初代誘導分化培養。

作為本發明的優選技術方案，步驟三的具體操作為：以無菌種子苗莖段為外植體，培養基選用WPM及MS培養基，設定植物生長素NAA濃度為0.1mg·L-1，細胞分裂素6-BA濃度為0.5mg·L-1，蔗糖30g·L-1，瓊脂6g·L-1，PH調至5.8～6.2，不同培養基各接種30瓶，每瓶接種一個外植體，3次重復。

作為本發明的優選技術方案，步驟四的具體操作為：在MS培養基內添加不同濃度6-BA，分別為0.1mg·L-1、0.3mg·L-1、0.5mg·L-1、1.0mg·L-1，和相同濃度的NAA，濃度為0.1mg·L-1，每個梯度接種30瓶外植體，每瓶選取兩個基本一致的莖段進行接種，設置3次重復，30d后統計葉芽的增殖個數。