[發明專利]一種檢測α-地貧和β-地貧點突變的方法

在審

• 申請號: 202011341324.3
• 申請日: 2020-11-24
• 公開（公告）號: CN112646872A
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 李仁強;王方金;羅俊峰;陳云弟
• 申請（專利權）人: 閱爾基因技術（蘇州）有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙) 32257
• 代理人: 王玉仙

本發明公開了一種檢測α?地貧和β?地貧點突變的方法，屬于基因檢測技術領域。本發明提供由異尾雙鏈熒光探針組成的探針對，將采用不同熒光基團標記的異尾雙鏈熒光探針按照探針編碼方式，加入到含有待檢測樣本的PCR反應體系中，利用不對稱PCR擴增產生大量單鏈DNA模板，熒光鏈特異性結合單鏈DNA模板釋放熒光信號，計算不同熒光通道的熒光凈增量，與突變判定閾值進行比較，判定點突變類型。本發明將不對稱PCR與熒光鏈檢測結合，操作簡單方便，檢測時間短，兼容自動化檢測流程，適合大量樣本檢測，尤其通過熒光編碼方式用4個熒光通道檢測24種地貧點突變，可提高檢測通量與突變位點，節省反應試劑與樣本用量。

技術領域

本發明涉及一種檢測α-地貧和β-地貧點突變的方法，屬于基因檢測技術領域。

背景技術

地中海貧血又稱海洋性貧血，在地中海、東南亞等地區多見，是一種嚴重威脅人類健康的致死、致殘的遺傳性血液病。由于早期報道的病例幾乎都是來自于地中海地區的移民，該病遂被命名為地中海貧血，簡稱地貧。根據基因缺陷的分類，臨床上主要分為α鏈珠蛋白地貧和β鏈珠蛋白地貧。根據基因分型，臨床上分為α地貧、β地貧、γ地貧及γβ地貧等，臨床上高發的主要是前兩者。α靜止型和標準型，以及β地貧雜合子由于無或僅有輕度貧血，一般稱為α或β地貧基因攜帶者，出現明顯貧血癥狀者稱為地貧患者。

α鏈珠蛋白地貧基因位于16號染色體短臂，正常個體中α珠蛋白是由四個α珠蛋白拷貝(αα/αα)合成的。如果這些變異導致該等位基因α珠蛋白不表達，則稱為α⁰地貧基因型；而該等位基因只損失一個α拷貝，或變異僅影響該等位基因的表達變化，則稱為α⁺地貧基因型。α-地貧最常見的原因是從染色體中缺失一個(-α)或兩個(--α)珠蛋白基因，偶爾存在基因突變(α^Tα或αα^T)可能導致所謂的非缺失性α-地貧，中國人群中最常見的三種非缺失型α-地貧點突變為αWS,αQS,αCS。

β鏈珠蛋白地貧基因位于11號染色體短臂，每條染色體有一個β珠蛋白基因。β-地中海貧血是由于β珠蛋白基因異常導致β珠蛋白鏈合成不足或結構異常，從而引起溶血性貧血。β地貧大部分是由于β珠蛋白中的HBB基因發生突變、小的缺失或插入所致，小部分是由于基因的大片段缺失所致。中國人群常見的β地貧基因點突變為IVS-II-654(CT),IVS-II-5(G＞C),CD71/72(+A),CD43(GT),CD41/42(-TCTT),CD41(-C),CD37(TGGTAG),CD31(-C),IVS-I-5(G＞C),IVS-I-1(G＞T),CD30(A＞G),CD27/28(+C),CD26(GA),CD17(AT),CD14/15(+G),Int(ATG＞AGG),Cap(-ACCC),nt28(A＞G),nt29(A＞G),nt30(T＞C),nt32(C＞A)等。

地中海貧血是全球分布最廣、累積人群最多的一種單基因遺傳病，目前尚無法治愈。輸血和骨髓移植可改善患者生活質量，但該方法給患病家庭帶來沉重的經濟負擔，對患者的心理帶來嚴重影響。地中海貧血屬于常染色體隱性遺傳病，如夫妻雙方都為地中海貧血基因攜帶者，下一代有1/4的幾率為地中海貧血患者。通過地中海貧血診斷避免地中海貧血患兒出生，這是目前國際上公認的首選預防措施，而基因檢測是目前地中海貧血診斷的金標準。