[發明專利]氟環唑和多菌靈的超高效液相色譜串聯質譜檢測方法

在審

• 申請號: 202011335108.8
• 申請日: 2020-11-24
• 公開（公告）號: CN112557529A
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 周勇;劉佳;朱航;馬海昊;劉哲銘;滿益龍;張城嘉;霍曉宜;賈楠;周小毛
• 申請（專利權）人: 湖南省農業生物技術研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 佛山粵進知識產權代理事務所(普通合伙) 44463
• 代理人: 耿鵬

1.一種檢測柑橘全果和果肉中氟環唑和多菌靈殘留量的超高效液相色譜串聯質譜法，其特征在于：該方法包括如下步驟：

(1)標準工作溶液的配制：

準確稱取標準品，用甲醇溶解并定容至50mL，得到1000mg/L的母液，再用甲醇配制不同濃度的系列標準溶液；

稱取10.00g經測定不含目標化合物的空白柑橘全果和果肉樣品，加入40mL提取液(乙腈)，混勻后，加入7g氯化鈉，渦旋提取3min，4000rmp離心3min，取上清液；

取1.5mL上述上清液放入預先加有100mg N-丙基乙二胺(PSA)的離心管中，混勻，11000rmp離心3min，準確移取1mL上清液濃縮近干后，用乙腈：水(1:1V/V)定容至2mL，過0.22μm濾膜，得到空白基質提取凈化液；以空白基質提取凈化液為溶劑配制氟環唑和多菌靈的柑橘全果和果肉基質標準工作溶液；

(2)用超高效液相色譜串聯質譜法測定氟環唑和多菌靈的基質標準工作溶液中農藥組分的提取離子峰面積，以濃度為橫坐標，以提取離子峰面積為縱坐標繪制出氟環唑和多菌靈的標準工作曲線；

(3)測定柑橘全果和果肉樣品中氟環唑和多菌靈殘留量，檢測方法包括以下步驟：

對柑橘全果和果肉樣品進行提取；稱取柑橘全果和果肉樣品10.00g，加入40mL提取液(乙腈)，混勻，繼續加入7g氯化鈉，渦旋提取3min，4000rmp離心3min，取上清液；

對所述待凈化的柑橘全果和果肉樣品提取液進行凈化；取1.5mL上述上清液放入預先加有100mg PSA的離心管中，渦旋混勻5min，11000rmp離心3min，準確移取1mL上清液濃縮近干后，用乙腈：水(1:1V/V)定容至2mL，過0.22μm濾膜后，得到用于測定氟環唑和多菌靈殘留的柑橘全果和果肉樣品提取凈化液；

(4)用超高效液相色譜串聯質譜法測定所述柑橘全果和果肉樣品提取凈化液中的氟環唑和多菌靈殘留量，記錄提取離子色譜峰面積，基質外標法定量，得到所述柑橘全果和果肉樣品提取凈化液中氟環唑和多菌靈的測定值；再將所述測定值帶入到定量計算公式中，最終得到柑橘全果和果肉樣品中待測氟環唑和多菌靈殘留量；

定量計算公式：R＝(C×V₁×V₃)/m×V₂，式中：R為樣品中農藥的殘留量(mg/kg)；C為根據樣品峰面積經標準曲線或單點定量計算得出樣品進樣濃度(mg/L)；m為稱樣量(g)；V1為提取液體積(mL)；V2為分取液體積(mL)；V3為定容體積(mL)；

步驟(2)和(4)中，所涉及的質譜條件見表1；

表1 氟環唑和多菌靈的質譜條件

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(2)和(4)中，所涉及的測定條件為：電離源模式：ESI；電離源極性：正；霧化氣：氮氣；鞘氣壓力：276kPa；離子傳輸管溫度：350℃；噴針溫度：320℃；離子噴霧電壓：3500V；色譜柱Hypersil GOLD C18(2.1mm×100mm 1.9μm)，柱溫：35℃；流速：0.3mL/min；進樣量：5μL；流動相B為甲醇溶液，流動相C為0.1％甲酸水溶液(v/v)，梯度洗脫條件見表2(表2中流動相B、C兩種溶劑的比例均為體積比)。

表2 梯度洗脫條件

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述的柑橘全果和果肉基質混合標準工作溶液中，氟環唑和多菌靈的濃度范圍均為0.5-1000μg/L。