[發(fā)明專(zhuān)利]LC-MS同時(shí)測(cè)定血漿中川芎嗪與阿司匹林

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011328225.1
• 申請(qǐng)日: 2020-11-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112345683A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-02-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李慧影;申瑩;于洋;于航
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 遼寧藥聯(lián)制藥有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/88
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/88
• 代理公司: 天津展譽(yù)專(zhuān)利代理有限公司 12221
• 代理人: 陳欣

本發(fā)明提供了LC?MS同時(shí)測(cè)定血漿中川芎嗪與阿司匹林，涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，包括通過(guò)十八烷基鍵合硅膠填料的色譜柱，液相流速為0.6ml/min?1.4ml/min，流動(dòng)相由甲醇與甲酸水溶液按一定配備配制而成，使用液質(zhì)串聯(lián)等度洗脫方法分離、分析血漿樣品經(jīng)處理后的川芎嗪與阿司匹林及其體內(nèi)代謝產(chǎn)物，本方法靈敏高效，檢測(cè)濃度低而準(zhǔn)確，方法操作簡(jiǎn)便易行，可以有效的檢驗(yàn)受試樣品是否與參比制劑存在生物等效，也可以對(duì)單一成份進(jìn)行測(cè)定，還可以在測(cè)定的血藥濃度的基礎(chǔ)上建立相應(yīng)的房室模型，求出其關(guān)鍵參數(shù)C_max、T_max、T_1/2、AUC等指標(biāo)，從而推知制劑之間是否存在生物等效。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種LC-MS同時(shí)測(cè)定血漿中川芎 嗪與阿司匹林的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

目前的存在以下缺點(diǎn)：阿司匹林與川芎嗪作為心血管領(lǐng)域各自有效藥物， 合用可以降低阿司匹林單獨(dú)作用時(shí)的出血傾向，又可以協(xié)同發(fā)揮對(duì)心腦血 管的修復(fù)與保護(hù)作用，發(fā)揮中西結(jié)合的藥理作用，為證明其與市售參比制 劑的生物等效性，急需開(kāi)發(fā)一種對(duì)血漿樣品中相應(yīng)兩組份進(jìn)行同時(shí)測(cè)定的 方法，填補(bǔ)需要同時(shí)給藥的患者依從性差及沒(méi)有同時(shí)檢測(cè)二者血藥濃度方 法的空白。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種 LC-MS同時(shí)測(cè)定血漿中川芎嗪與阿司匹林的方法。

本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

LC-MS同時(shí)測(cè)定血漿中川芎嗪與阿司匹林，其特征在于，包括通過(guò)十 八烷基鍵合硅膠填料的色譜柱，液相流速為0.6ml/min-1.4ml/min，流動(dòng) 相由甲醇與甲酸水溶液按一定配備配制而成，使用液質(zhì)串聯(lián)等度洗脫方法 分離、分析血漿樣品經(jīng)處理后的川芎嗪與阿司匹林及其體內(nèi)代謝產(chǎn)物。

所述流動(dòng)相中甲醇比例通常為40％到90％的溶液體系，但通常采用甲 醇/0.1％甲酸水溶液(80：20)的溶液。

所述甲醇與甲酸水的混合溶液系指由甲醇、甲酸、純凈水混合而成的 PH值在2-3之間的溶液，其濃度為含甲酸0.05％到0.15％，通常為0.1％。

所述血漿樣品處理包括先采用沉淀法提取血漿中主要成份川芎嗪與 阿司匹林，并經(jīng)過(guò)振蕩器進(jìn)行窩流、離心、取上清、氮?dú)獯蹈梢幌盗胁襟E 對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及血漿樣品進(jìn)行處理。

所述標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)定為二個(gè)成份川芎嗪及阿司匹林均6個(gè)濃度點(diǎn)混合配制 為甲醇溶液，按照血漿樣品預(yù)實(shí)驗(yàn)的血漿濃度結(jié)果進(jìn)行設(shè)置線(xiàn)性范圍，初 始濃度分別為0.02ug/ml、0.08ug/ml、0.4ug/ml、1.6ug/ml、8.0ug /ml、40.0ug/ml，其中0.08ug/ml、1.6ug/ml及另配的32.0ug/ml 設(shè)置為QC(質(zhì)控)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度。

所述標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及QC血漿樣品配制過(guò)程如下：取線(xiàn)性濃度點(diǎn)100ul置 2.5ml離心管中分別加入等量的濃度為40.0ug/ml的內(nèi)標(biāo)水楊酸溶液，再 加入空白血漿500ul，加入甲醇沉淀試劑1000ul，用窩流機(jī)旋起窩流1min 左右，再用離心機(jī)3000轉(zhuǎn)/min離心10min，移取上清液，氮?dú)庀率覝卮?掃至液體揮干，用甲醇100ul復(fù)溶樣品，精密量取20ul注入色譜儀，記錄色譜圖至主成分色譜峰保留時(shí)間的2倍，以供試品色譜圖中川芎嗪及阿 司匹林與內(nèi)標(biāo)水楊酸的峰面積比值計(jì)算各自響應(yīng)值當(dāng)縱坐標(biāo)，濃度為橫坐 標(biāo)，方法確證期間，每個(gè)濃度點(diǎn)重復(fù)配制3次，3條數(shù)據(jù)擬合作為標(biāo)準(zhǔn)曲 線(xiàn)。QC同法操作，低中高每濃度6樣本，分步于當(dāng)天試驗(yàn)內(nèi)容之間，只有 QC代入當(dāng)天曲線(xiàn)，偏差在合理范圍內(nèi)，二個(gè)QC之間的數(shù)據(jù)才可以采用，否則不合格的數(shù)據(jù)不予采信，需要重新配制進(jìn)樣分析。