[發(fā)明專利]乳制品中骨橋蛋白的分析方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011315213.5
• 申請日: 2020-11-20
• 公開（公告）號: CN112557483B
• 公開（公告）日: 2023-08-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王象欣;解慶剛;崔東影;蔣士龍;梁愛梅
• 申請（專利權(quán)）人: 黑龍江飛鶴乳業(yè)有限公司
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447
• 代理公司: 北京康信知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11240
• 代理人: 梁文惠

本發(fā)明提供了一種乳制品中骨橋蛋白的分析方法。該分析方法包括：步驟S1，去除乳制品水溶液中的酪蛋白，得到處理液；步驟S2，調(diào)節(jié)處理液的pH值至6.5～7.5，得到待測液；以及步驟S3，采用中性涂層毛細(xì)管對待測液中的骨橋蛋白進(jìn)行毛細(xì)管電泳法分析。發(fā)明人篩選出中性涂層毛細(xì)管對乳制品中的OPN進(jìn)行檢測。且鑒于酪蛋白在OPN的出峰位置存在嚴(yán)重的干擾作用，本申請先對乳制品水溶液進(jìn)行酪蛋白的去除處理后調(diào)節(jié)pH值得到待測液，然后，利用中性涂層毛細(xì)管在該pH值的條件下最大程度的降低疏水性以及靜電溶質(zhì)和管壁間的交互作用，從而最大程度的消除電滲流，進(jìn)而準(zhǔn)確的檢測乳制品中的骨橋蛋白，且上述方法操作簡便、快捷。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及乳制品技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種乳制品中骨橋蛋白的分析方法。

背景技術(shù)

骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)是存在于母乳中的一種重要蛋白質(zhì)，歸類于細(xì)胞外基質(zhì)蛋白。從結(jié)構(gòu)上看，OPN是一種由約300個氨基酸殘基組成的高度磷酸化的酸性糖蛋白，牛乳和人乳中的OPN在氨基酸序列和磷酸化方式上非常相似，都含有特異的RGD(精氨酸—甘氨酸—天冬氨酸，Arg-Glu-Asp)序列，這個序列對OPN的粘附功能起著重要的作用，并且牛乳和人乳OPN在同一區(qū)域都被O-糖基化。人乳中OPN含量約為138mg/L，遠(yuǎn)高于牛乳(約為18mg/L)中的水平。嬰幼兒配方奶粉的目標(biāo)是實(shí)現(xiàn)母乳化，因此可以明確OPN對嬰幼兒的生物學(xué)影響意義深遠(yuǎn)。當(dāng)前市場上的嬰幼兒配方乳粉幾乎都沒有強(qiáng)化OPN，因此OPN作為增強(qiáng)嬰幼兒配方乳粉與母乳相似性的潛在候選蛋白，越來越受到嬰幼兒配方乳粉制造商的關(guān)注，其在乳制品中的定量檢測也會逐漸被關(guān)注。

目前，嬰幼兒配方乳粉中OPN的檢測研究較少，其中AOAC開發(fā)的質(zhì)譜法(Analytical?method?to?quantify?osteopontin?in?dairy?powders?and?infantformulas?by?signature?peptide?quantification?with?UHPLC-MS/MS)是基于蛋白組學(xué)的原理，特征是使用胰蛋白酶酶解骨橋蛋白，通過質(zhì)譜檢測酶解產(chǎn)生的特異性肽段，來對乳制品中的骨橋蛋白進(jìn)行鑒定和間接定量的方法。但上述方法僅局限于對未生成美拉德反應(yīng)產(chǎn)物的乳制品中的骨橋蛋白的定量測定，且檢測精度偏低，不能對骨橋蛋白的含量進(jìn)行有效定量。

此外，由于OPN是一種分泌型、酸性的磷酸化糖蛋白，在乳體系中帶負(fù)電荷，可與帶正電荷的蛋白質(zhì)通過靜電結(jié)合形成蛋白復(fù)合物，而此蛋白復(fù)合物無法通過色譜方法進(jìn)行解離；因此需要一種高效、便捷的前處理手段，并結(jié)合準(zhǔn)確的定量方法來檢測乳基質(zhì)中OPN的含量，以保障原料和成品的含量滿足要求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的在于提供一種乳制品中骨橋蛋白的分析方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中的乳制品中骨橋蛋白的分析方法難以對OPN進(jìn)行準(zhǔn)確定量的問題。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了一種乳制品中骨橋蛋白的分析方法，該分析方法包括：步驟S1，去除乳制品水溶液中的酪蛋白，得到處理液；步驟S2，調(diào)節(jié)處理液的pH值至6.5～7.5，得到待測液；以及步驟S3，采用中性涂層毛細(xì)管對待測液中的骨橋蛋白進(jìn)行毛細(xì)管電泳法分析。

進(jìn)一步地，上述毛細(xì)管電泳法所使用的緩沖溶液包括磷酸鹽緩沖溶液、硼酸鹽緩沖液、乙酸鹽緩沖溶液、硼砂緩沖溶液、檸檬酸緩沖溶液中的任意一種或多種的組合，優(yōu)選緩沖溶液的pH值為6.5～7.5，進(jìn)一步地優(yōu)選緩沖溶液的pH值為6.8～7.2，優(yōu)選磷酸鹽緩沖溶液包括磷酸二氫鈉溶液和磷酸氫二鈉溶液。

進(jìn)一步地，上述待測液的pH值與緩沖溶液的pH值相同。

進(jìn)一步地，上述毛細(xì)管電泳法分析時，工作電壓為-5～-30kv，進(jìn)一步地優(yōu)選為-8～-12kv；優(yōu)選檢測波長為200～450nm，進(jìn)一步地優(yōu)選為210～218nm；優(yōu)選檢測頻率為2～18Hz，進(jìn)一步地優(yōu)選為2～4Hz。