[發明專利]一種羽扇豆過敏原Lupan1的夾心ELISA方法在審
| 申請號： | 202011309014.3 | 申請日： | 2020-11-20 |
| 公開（公告）號： | CN114539398A | 公開（公告）日： | 2022-05-27 |
| 發明（設計）人： | 王碩;胡耀中;陸旸;張川;張博崴 | 申請（專利權）人： | 南開大學 |
| 主分類號： | C07K16/16 | 分類號： | C07K16/16;C07K1/22;C07K1/16;C12N15/70;C12N15/13;G01N33/68 |
| 代理公司： | 天津合正知識產權代理有限公司 12229 | 代理人： | 邢月;張艷梅 |
| 地址： | 300071*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 羽扇豆 過敏原 lupan1 夾心 elisa 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種羽扇豆過敏原Lupan1的夾心ELISA方法，其特征在于：包括如下步驟：
(1)納米抗體的制備及篩選：分別使用限制性核酸內切酶PstⅠ和BstⅡ對質粒和質粒載體進行雙酶切，將得到的VHH基因片段與質粒載體通過T4 DNA連接酶進行連接形成重組質粒，對重組質粒進行純化，然后將純化后的重組質粒電轉化入大腸桿菌感受態細胞中進行納米抗體的表達，純化得到的納米抗體蛋白；
(2)雙抗夾心ELISA方法的構建：在捕獲抗體中加入羽扇豆總蛋白，使其與捕獲抗體結合，然后加入檢測抗體，鼠抗HA單克隆抗體為一抗，HRP標記的單克隆抗體為二抗，進行顯色后即成。
2.權利要求1所述的羽扇豆過敏原Lupan1的夾心ELISA方法，其特征在于：得到所述的納米抗體蛋白后將帶有His標簽的納米抗體作為捕獲抗體，帶有His和HA標簽的納米抗體作為檢測抗體。
3.權利要求2所述的羽扇豆過敏原Lupan1的夾心ELISA方法，其特征在于：所述的捕獲抗體的濃度為7.5mg/ml，檢測抗體的濃度為7.5mg/ml。
4.權利要求1所述的羽扇豆過敏原Lupan1的夾心ELISA方法，其特征在于：羽扇豆總蛋白的最低檢測限為1.15mg/L，定量限為29.75mg/L。
5.權利要求1-4任一項所述的羽扇豆過敏原Lupan1的夾心ELISA方法的用途，其特征在于：所述的方法在制備檢測試劑盒中的應用。
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