[發明專利]臍帶間充質干細胞脂質囊泡體的制備方法及其在促進皮膚再生中的應用

有效

• 申請號: 202011307065.2
• 申請日: 2020-11-19
• 公開（公告）號: CN112410292B
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 張玲潔;曾曉麗;陳麗璇
• 申請（專利權）人: 廣東香雪干細胞再生醫學科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61K35/51;A61K9/00;A61P17/02;A61P17/16
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿

1.臍帶間充質干細胞外泌體的制備方法，其特征在于，以切向流超濾技術進行提取，包括：

步驟1：細胞培養上清液經0~10℃，1000 g~3000 g離心5~15 min；

步驟2：經離心的上清液經0.65 μm濾膜過濾，取濾液；

步驟3：所述濾液以截留分子量為500 kDa的濾膜進行過濾，跨膜壓為12 psi，流速為10mL/min，剪切速率為2500 s^-1；

步驟4：液體體積濃縮至所述細胞培養上清液的0.5%~2%后，加入2倍體積的PBS緩沖液繼續濃縮至液體體積為所述細胞培養上清液的1.5%~2.5%，再依次經0.45 μm、0.22 μm濾膜過濾后，收集含有外泌體的濾液；

所述切向流超濾的裝置型號為Cogent? M1；步驟3所述的濾膜材質為聚醚砜，型號為Pellicon? 2;

步驟1所述細胞培養上清液由P3代臍帶間充質干細胞培養獲得，其培養方法包括：以DMEM高糖培養基為培養液，將臍帶間充質干細胞以截留分子量為20 kDa、材質為聚砜纖維的3D中空培養筒培養，糖消耗量穩定一周后，每隔2天收集細胞培養上清液。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟1中所述的離心條件為4℃，2000g離心10 min。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟4中，所述液體體積濃縮至所述細胞培養上清液的1%后，加入2倍體積的PBS緩沖液繼續濃縮至液體體積為所述細胞培養上清液的2%。