[發(fā)明專利]一種小粒徑、高穩(wěn)定性多室及單室脂質(zhì)體的同步制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011297330.3
• 申請(qǐng)日: 2020-11-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112545994B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-10-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁菊;吳文瀾;郭潤(rùn)發(fā);孫乾坤;何佳彧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南科技大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K9/127
• 分類號(hào): A61K9/127;A61K47/24;A61K47/28;A61K47/22
• 代理公司: 洛陽(yáng)公信知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 41120
• 代理人: 逯雪峰

本發(fā)明涉及一種小粒徑、高穩(wěn)定性多室及單室脂質(zhì)體的同步制備方法，屬于化工和制藥領(lǐng)域，本發(fā)明以脂質(zhì)體粒徑為控制對(duì)象，利用單因素實(shí)驗(yàn)對(duì)影響粒徑的工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化，采用改良薄膜分散法制備了粒徑約110 nm的多室脂質(zhì)體，并通過(guò)上調(diào)水合溫度55℃，實(shí)現(xiàn)了多室脂質(zhì)體向單室脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)變，并利用動(dòng)態(tài)光散射（DLS）和透射電子顯微鏡（TEM）技術(shù)檢測(cè)了多室和單室脂質(zhì)體的分散性和形態(tài)學(xué)特征。該制備工藝簡(jiǎn)單，可同時(shí)實(shí)現(xiàn)多室脂質(zhì)體和單室脂質(zhì)體的制備，制得的多室和單室脂質(zhì)體粒徑均一、表面光滑、分散性良好，且具有良好的儲(chǔ)存穩(wěn)定性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化工與制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種多室及單室脂質(zhì)體的同步制備方法。

背景技術(shù)

脂質(zhì)體（liposome）是由大豆卵磷脂和膽固醇等兩親性分子組成的雙分子層脂質(zhì)囊泡，其粒徑從10 nm到2 μm不等。根據(jù)粒徑和層數(shù)的不同，脂質(zhì)體可以分為以下3類：粒徑10~100 nm的單層脂質(zhì)體稱為小單室脂質(zhì)體（small unilamellar vesicles，SUVs）；粒徑100 nm~1 μm的單層脂質(zhì)體稱為大單室脂質(zhì)體（large unilamellar vesicles，LUVs）；粒徑1~5 μm的多層囊泡稱為多室脂質(zhì)體（multilamellar lipid vesicles，MLVs）。其中，小粒徑的多室脂質(zhì)體比較少見(jiàn)。脂質(zhì)體的粒徑是決定其穩(wěn)定性和生物體內(nèi)應(yīng)用的關(guān)鍵參數(shù)。多室脂質(zhì)體由幾個(gè)脂質(zhì)同心圓囊泡疊加而成，由于脂質(zhì)層數(shù)較多，脂質(zhì)層間隙脂溶性藥物的包封率高，但層與層之間距離較小容易發(fā)生膜融合從而使脂質(zhì)體粒徑變大且不穩(wěn)定。粒徑過(guò)大的單室脂質(zhì)體存在穩(wěn)定性差，粒徑大小不均等問(wèn)題。通常，脂質(zhì)體的粒徑越小，脂質(zhì)體越穩(wěn)定，粒徑100 nm左右的脂質(zhì)體由于在腫瘤部位具有較好的EPR效應(yīng)（EnhancedPermeability and Retention Effect）而受到極大青睞。另外，脂質(zhì)體粒徑的大小還直接影響載體是否能夠順利進(jìn)入組織和細(xì)胞發(fā)揮作用。

影響脂質(zhì)體粒徑的因素包括制備脂質(zhì)體時(shí)所用的磷脂種類、磷脂與膽固醇的比例以及磷脂的相變溫度（Tc）等。相變溫度是影響脂質(zhì)體形態(tài)的很重要的因素之一：當(dāng)溫度低于磷脂相變溫度時(shí)，脂質(zhì)體中磷脂之間的排列較為緊湊，脂質(zhì)體狀態(tài)穩(wěn)定；當(dāng)環(huán)境溫度高于磷脂相變溫度時(shí)，磷脂排列松散，脂質(zhì)體內(nèi)部及脂質(zhì)體之間的流動(dòng)性增大。除此之外，對(duì)脂質(zhì)體進(jìn)行機(jī)械擠壓、離心或過(guò)凝膠色譜柱等物理方法也可以較好控制脂質(zhì)體粒徑大小。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種小粒徑、高穩(wěn)定性多室及單室脂質(zhì)體的同步制備方法，采用所述制備方法制得的多室和單室脂質(zhì)體粒徑均一、表面光滑、分散性良好，且具有良好的儲(chǔ)存穩(wěn)定性。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的具體方案為：

一種小粒徑、高穩(wěn)定性多室及單室脂質(zhì)體的同步制備方法，包括以下步驟：分別稱取大豆卵磷脂、膽固醇和維生素C于500 mL圓底燒瓶中，加入三氯甲烷溶解，再加入玻璃珠于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋蒸至溶劑揮發(fā)完畢，此時(shí)圓底燒瓶壁上形成一層均勻薄膜；將圓底燒瓶置于真空干燥箱中干燥過(guò)夜；取出圓底燒瓶后，加入濃度0.1M的磷酸鹽緩沖溶液60-90 mL進(jìn)行水合，控制水合溫度為35-65℃，氮?dú)猸h(huán)境下渦旋2 h，置于超聲儀中超聲處理30 min；10000-20000rpm離心，取上清液，用0.22 μm濾膜過(guò)濾，于4 ℃冷藏、備用；

所述大豆卵磷脂和膽固醇的總質(zhì)量為0.11g、質(zhì)量比為8:1-12:1；所述維生素C的質(zhì)量為大豆卵磷脂的1%。

作為對(duì)上述方案的進(jìn)一步優(yōu)化，所述大豆卵磷脂和膽固醇的質(zhì)量比為12:1。

作為對(duì)上述方案的進(jìn)一步優(yōu)化，所述磷酸緩沖液的用量為80 mL。

作為對(duì)上述方案的進(jìn)一步優(yōu)化，所述離心的轉(zhuǎn)速為20000rpm；

作為對(duì)上述方案的進(jìn)一步優(yōu)化，所述水合溫度為55℃。

有益效果：