[發明專利]一種重組轉氨酶和所述重組轉氨酶的突變體及其應用

有效

• 申請號: 202011280191.3
• 申請日: 2020-11-16
• 公開（公告）號: CN112280761B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 于慧敏;李付龍;梁有向;鄭煜堃;魏宇文
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/00;C12R1/19
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

1.一種轉氨酶突變體，其特征在于，所述轉氨酶突變體的氨基酸序列是由SEQ ID NO：2所示的野生型氨基酸序列發生突變得到的氨基酸序列，所述突變方式為Y125A、Y125T、Y70F/Y125A、Y70V/Y125A、Y70T/Y125A、Y70A/Y125V、Y70T/V72A/Y125F、Y70A/V72T/Y125V、Y70V/V72T/Y125V、Y70F/V72T/Y125V、Y70F/V72A/Y125V、Y70T/V72A/Y125V或Y70T/V72A/Y125A中的任意一種。

2.據權利要求1所述的轉氨酶突變體，其特征在于，所述突變方式為Y70T/V72A/Y125A。

3.根據權利要求2所述的轉氨酶突變體，其特征在于，所述轉氨酶突變體的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。

4.一種編碼權利要求2或3中所述轉氨酶突變體的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

5.一種重組表達載體，其特征在于，所述重組表達載體包含權利要求4所述的基因。

6.根據權利要求5所述的重組表達載體，其特征在于，所述重組表達載體包括pET系列載體、穿梭載體、噬菌體或病毒載體。

7.根據權利要求5所述的重組表達載體，其特征在于，所述重組表達載體為pET-28a。

8.一種重組宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞包含權利要求5至7中任一項所述的重組表達載體。

9.根據權利要求8所述的重組宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞為原核細胞、酵母或真核細胞。

10.根據權利要求8所述的重組宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞為大腸桿菌BL21(DE3)。

11.一種酶制劑，其特征在于，所述酶制劑包括權利要求1或2所述的轉氨酶突變體。

12.一種如權利要求1或2所述的轉氨酶突變體在催化羥基酮和潛手性酮類化合物發生轉氨反應制備手性氨基醇及手性胺中的用途，其特征在于，所述羥基酮和潛手性酮類化合物為：4-羥基-2-丁酮、1-羥基-2-丁酮、羥基丙酮、1-甲氧基-2-丙酮、2-戊酮、2-己酮、2-庚酮、4-甲基-2-戊酮、5-甲基-2-己酮、苯乙酮、2-羥基苯乙酮、2-環己烯-1-酮、2-甲基環己酮、3-甲基環己酮、1-茚酮、1-四氫萘酮和N-叔丁氧羰基-3-哌啶酮；所述手性氨基醇及手性胺為：(R)-3-氨基丁醇、(R)-2-氨基丁醇、(R)-丙氨醇、(R)-1-甲氧基-2-丙胺、(R)-2-戊胺、(R)-2-己胺、

(R)-2-庚胺、(R)-1,3-二甲基丁胺、(R)-1,4-二甲基戊胺、(R)-苯乙胺、

(S)-苯甘氨醇、(R)-2-環己烯-1-胺、trans-2-甲基環已胺、trans-3-甲基環已胺、(R)-(-)-1-氨基茚滿、(R)-(+)-1,2,3,4-四氫萘胺、(R)-1-叔丁氧羰基-3-氨基哌啶。

13.根據權利要求12所述的用途，其特征在于，所述羥基酮和潛手性酮類化合物為2-環己烯-1-酮、2-甲基環己酮、3-甲基環己酮、1-茚酮、1-四氫萘酮和N-叔丁氧羰基-3-哌啶酮；所述手性氨基醇及手性胺為(R)-2-環己烯-1-胺、trans-2-甲基環已胺、trans-3-甲基環已胺、(R)-(-)-1-氨基茚滿、(R)-(+)-1,2,3,4-四氫萘胺和(R)-1-叔丁氧羰基-3-氨基哌啶。