[發明專利]一種小鼠截短IL-36γ蛋白及其制備方法

在審

• 申請號: 202011278371.8
• 申請日: 2020-11-16
• 公開（公告）號: CN112358539A
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 朱俊豐;徐瑩;任蕾;劉姍姍
• 申請（專利權）人: 桂林醫學院附屬醫院
• 主分類號: C07K14/54
• 分類號: C07K14/54;C12N15/24;C12N15/70;C07K1/22;A61P37/02;A61P1/00;A61P29/00;C12R1/19
• 代理公司: 西安匯恩知識產權代理事務所(普通合伙) 61244
• 代理人: 張延長

本發明提供了一種小鼠截短IL?36γ蛋白，具有序列表SEQ.ID.No.1的核苷酸序列，具有序列表SEQ.ID.No.2的氨基酸序列；還提供了制備方法，構建pUC57?mIL?36γ質粒作為模板，以P1和P2為特異性引物，在引物的兩側導入Nco Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位點，PCR擴增，構建重組表達載體pET28a?mIL?36γ，轉化大腸桿菌BL21，得到IL?36γ重組工程菌，接種于含卡那霉素的LB培養基中培養后誘導表達，離心得菌體，超聲裂解后離心，取上清液，用Ni?NAT柱純化，得到小鼠截短IL?36γ蛋白。本發明小鼠截短IL?36γ蛋白的制備方法簡單，產量高，采用親和層析，能夠一步得到純度較高的蛋白，本發明制備的小鼠截短IL?36γ蛋白能夠在免疫調節方面，特別是炎癥性腸病中發揮作用。

技術領域

本發明屬于IL-36γ蛋白制備技術領域，具體涉及一種小鼠截短IL-36γ蛋白及其制備方法。

背景技術

IL-36γ蛋白功能是在免疫調節方面，特別是在炎癥性腸病中發揮作用，但目前并未IL-36γ蛋白的人工合成方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于針對上述現有技術的不足，提供一種小鼠截短IL-36γ蛋白及其制備方法，該小鼠截短IL-36γ蛋白的制備方法簡單，產量高，采用親和層析，能夠一步得到純度較高的蛋白，本發明制備的小鼠截短IL-36γ蛋白能夠在免疫調節方面，特別是自身免疫疾病中發揮作用。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：一種小鼠截短IL-36γ蛋白，所述小鼠截短IL-36γ蛋白具有序列表SEQ.ID.No.1的核苷酸序列；所述小鼠截短IL-36γ蛋白具有序列表SEQ.ID.No.2的氨基酸序列。

本發明還提供了一種制備上述的小鼠截短IL-36γ蛋白的方法，該方法為：

S1、構建pUC57-mIL-36γ質粒：合成小鼠截短IL-36γ蛋白基因，克隆入pUC57載體質粒，構建pUC57-mIL-36γ質粒；

S2、PCR擴增：以P1和P2為特異性引物，在引物的兩側導入NcoⅠ和XhoⅠ酶切位點，以S1中得到的pUC57-mIL-36γ質粒為模板，進行PCR擴增，得到PCR擴增產物；所述P1特異性引物具有序列表SEQ.ID.No.3的核苷酸序列；所述P2特異性引物具有序列表SEQ.ID.No.4的核苷酸序列；

S3、重組表達載體pET28a-mIL-36γ的構建：將pET28a載體質粒和S2中得到的PCR擴增產物分別均用NcoⅠ內切酶和XhoⅠ內切酶進行雙酶切，雙酶切后凝膠回收pET28a載體和IL-36γ，將回收后的pET28a載體與IL-36γ經T4連接酶定向連接，構建重組表達載體pET28a-mIL-36γ；

S4、轉化：將S3中得到的重組表達載體pET28a-mIL-36γ轉化大腸桿菌BL21，得到IL-36γ重組工程菌；

S5、小鼠截短IL-36γ蛋白的誘導表達：將S4中得到的IL-36γ重組工程菌接種于含卡那霉素的LB培養基中，在溫度為37℃、搖速為200r/min的條件下震蕩培養12h～14h后，以1:100的比例進行擴大培養，在溫度為37℃、搖速為210r/min的條件下震蕩培養3h，至OD600達到0.6時止，加入濃度為0.7mmol/L的異丙基硫代半乳糖苷溶液，進行誘導表達，離心后，得到菌體；

S6、小鼠截短IL-36γ蛋白的純化：采用超聲破碎法將S5中得到的菌體進行超聲裂解后離心，取上清液；

S7、用Ni-NAT柱對S6中得到的上清液進行純化，得到小鼠截短IL-36γ蛋白。