[發(fā)明專利]一種快速熒光蛋白酶活性檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011276074.X
• 申請日: 2020-11-16
• 公開（公告）號: CN112326620A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫永剛
• 申請（專利權(quán)）人: 南京思泰樂生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種快速熒光蛋白酶活性檢測方法，其特征在于包括以下步驟：

S1、預(yù)先設(shè)定一份蛋白酶含量值參考表；

S2、配置熒光用探針的熒光溶液：以市售純度高于98%的芘、尼羅紅、 香豆素481、 蘇丹紅、 氟硼熒染料為熒光探針，將疏水性染料溶解到市售光譜純丙酮、 氯仿或甲醇的有機(jī)溶劑中并添加具有不同溫度下和200-500nm不同紫外光激發(fā)下呈現(xiàn)不同發(fā)光顏色的熒光材料， 配制熒光溶液；

S3、根據(jù)預(yù)先設(shè)定的蛋白酶含量值參考表對應(yīng)不同顏色的熒光溶液；創(chuàng)建蛋白酶熒光色參考表；

S4、測定樣品中是否有蛋白酶；

S5、然后將樣品中含有蛋白酶的樣品放入到S2的熒光溶液中，進(jìn)行培養(yǎng)，在溫度為20-37℃條件下,培養(yǎng)1.5-2小時；

S6、用戶在35-37°C下進(jìn)行熒光光譜跟蹤檢測，獲得顯示不同的熒光顏色，然后在蛋白酶熒光色參考表中查找對應(yīng)的蛋白酶含量值。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速熒光蛋白酶活性檢測方法，其特征在于：還包括在標(biāo)記蛋白酶時還需要預(yù)先創(chuàng)建不同溫度下，對應(yīng)熒光材料的顏色變化，然后根據(jù)樣品的實(shí)時溫度，查詢對應(yīng)標(biāo)記熒光的顏色值。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速熒光蛋白酶活性檢測方法，其特征在于：在步驟S4中測定樣品中是否有蛋白酶的具體方法如下：取樣品中的部分，加入濃度為2-3μM的氮雜環(huán)羅丹明雙酰胺培養(yǎng)液培養(yǎng)1-3小時，然后通過檢測培養(yǎng)液的熒光強(qiáng)度，判斷蛋白酶的存在情況，熒光強(qiáng)度越高，蛋白酶越多。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速熒光蛋白酶活性檢測方法，其特征在于：在步驟S4中測定樣品中是否有蛋白酶的具體方法還可以是：取樣品中的部分加入金屬納米簇反應(yīng)，得到反應(yīng)產(chǎn)物，檢測所述反應(yīng)產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度，所述反應(yīng)產(chǎn)物無變化判斷所述樣品中無蛋白酶，若有變化，說明樣品中有蛋白酶。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速熒光蛋白酶活性檢測方法，其特征在于：在步驟S2中配置熒光用探針的熒光溶液：以市售純度高于98%的芘、尼羅紅、 香豆素481、 蘇丹紅、 氟硼熒染料為熒光探針，將疏水性染料溶解到市售光譜純丙酮、 氯仿或甲醇的有機(jī)溶劑中并添加具有不同溫度下和450nm紫外光激發(fā)下呈現(xiàn)不同發(fā)光顏色的熒光材料， 配制熒光溶液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速熒光蛋白酶活性檢測方法，其特征在于: 在步驟S6中用戶在36°C下進(jìn)行熒光光譜跟蹤檢測，獲得顯示不同的熒光顏色，然后在蛋白酶熒光色參考表中查找對應(yīng)的蛋白酶含量值。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種快速熒光蛋白酶活性檢測方法，其特征在于:所述金屬納米簇包括牛血清蛋白-金納米簇或牛血清蛋白-銀納米簇或多肽-金納米簇或多肽-銀納米簇中的一種。