[發(fā)明專利]一種阿奇霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011273165.8
• 申請(qǐng)日: 2020-11-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112526119B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-02-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊昌松;王世恩;郝士元
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京元恩生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/53
• 分類號(hào): G01N33/53;G01N33/58;G01N33/543
• 代理公司: 江蘇長(zhǎng)德知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32478
• 代理人: 劉威威

本發(fā)明提供了一種阿奇霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，包括96孔酶標(biāo)板、酶標(biāo)記抗體、阿奇霉素標(biāo)準(zhǔn)品、20×濃縮洗滌液、復(fù)溶液工作液、底物A液、底物B液、終止液，所述96孔酶標(biāo)板上包被有阿奇霉素半抗原?載體蛋白，所述酶標(biāo)記物濃縮液為辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的阿奇霉素特異性抗體。本發(fā)明還提供了阿奇霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒在檢測(cè)牛奶、蜂蜜樣本中的應(yīng)用。本發(fā)明阿奇霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、使用方便、對(duì)檢測(cè)人員要求低，且本發(fā)明試劑盒檢測(cè)靈敏度高，檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度等技術(shù)餐順均較好，是非常理想的阿奇霉素殘留檢測(cè)產(chǎn)品。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明生物技術(shù)檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種阿奇霉素酶聯(lián)免疫快速檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

阿奇霉素(azithromycin，AZM)為半合成十五元大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，是20世紀(jì)80年代研發(fā)的。阿奇霉素具有良好的廣譜抗菌效果，廣泛用于人呼吸道、泌尿道和軟組織感染和性傳播疾病的預(yù)防和治療，也曾用于畜禽疾病的臨床治療。阿奇霉素屬于人醫(yī)臨床控制使用的抗菌藥，將其用于食品動(dòng)物，會(huì)產(chǎn)生耐藥性問(wèn)題，影響動(dòng)物疫病控制、食品安全和人類健康，不符合獸藥安全有效審批原則，將阿奇霉素藥物列為禁用獸藥。

目前，阿奇霉素的檢測(cè)主要為液相色譜法、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法等，而且多集中在制藥原料、血液等中的檢測(cè)。儀器分析法，雖然具有檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，結(jié)果更可靠，重復(fù)性好等特點(diǎn)，但是其前處理程序繁瑣，測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)，儀器成本高，對(duì)檢測(cè)人員要求高，不利于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的是提供一種檢測(cè)靈敏度高，現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)反應(yīng)時(shí)間短，檢測(cè)簡(jiǎn)便的阿奇霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，能夠?qū)崿F(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)大量樣本的快速篩查。

本發(fā)明技術(shù)方案：

本發(fā)明阿奇霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒包括96孔酶標(biāo)板、酶標(biāo)記抗體工作液、阿奇霉素標(biāo)準(zhǔn)品、20×濃縮洗滌液、復(fù)溶工作液、底物A液、底物B液、終止液，其中96孔酶標(biāo)板上包被有阿奇霉素半抗原-OVA偶聯(lián)物，酶標(biāo)記抗體為辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的阿奇霉素特異性抗體。

其中，阿奇霉素標(biāo)準(zhǔn)品為0μg/L，0.02μg/L，0.06μg/L，0.18μg/L，0.54μg/L，1.62μg/L。

其中，20×濃縮洗滌液的成分是含2％吐溫-20，0.2mol/L磷酸鹽緩沖液，pH 7.0。

其中，復(fù)溶工作液的成分是2％氯化鈉溶液。

其中，底物A液為過(guò)氧化氫，底物B液為TMB。

其中，終止液為2mol/L H₂SO₄。

進(jìn)一步地，阿奇霉素半抗原結(jié)構(gòu)式為

由以下步驟得到：

1)稱取阿奇霉素1.0g，用20mL丙酮與20mL吡啶溶解，攪拌均勻。

2)稱取馬來(lái)酸酐0.5g加入步驟1)溶液，80℃條件下攪拌，反應(yīng)6h后停止，蒸干后上硅膠柱，洗脫液為石油醚:乙酸乙酯＝1:1，分離純化，得阿奇霉素半抗原。

所述阿奇霉素抗體由阿奇霉素半抗原-BSA偶聯(lián)物作為免疫原制備得到。

本發(fā)明的另一個(gè)目的，還提供了一種阿奇霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒在檢測(cè)牛奶、雞肉樣本中的應(yīng)用。酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒檢測(cè)具體步驟為：牛奶、雞肉樣本的處理；用本發(fā)明阿奇霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒檢測(cè)；分析檢測(cè)結(jié)果。

本發(fā)明有益效果：

本發(fā)明阿奇霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒建立了直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)阿奇菌素殘留。本發(fā)明阿奇菌素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒對(duì)阿奇霉素的檢測(cè)靈敏度高達(dá)0.02μg/L，對(duì)牛奶、雞肉樣本的回收率在89～111％之間，板內(nèi)變異系數(shù)小于5％，板間變異系數(shù)小于6％。