[發明專利]一種COVID-19疫苗及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011264313.X
• 申請日: 2020-11-12
• 公開（公告）號: CN112386684A
• 公開（公告）日: 2021-02-23
• 發明（設計）人: 李鵬;秦樂;湯朝陽;蔣治武;趙若聰;崔元彬;姚瑤;胡朵
• 申請（專利權）人: 佛山昭泰創新生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/215
• 分類號: A61K39/215;A61P31/14;C12N15/861;C12N15/50;C12N5/10
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明提供了一種COVID?19疫苗及其制備方法和應用，所述COVID?19疫苗包括表達SARS?CoV?2 S蛋白的T細胞；所述COVID?19疫苗的制備方法包括以下步驟：(1)將SARS?CoV?2 S蛋白的編碼基因插入腺病毒載體中，構建重組腺病毒載體；(2)將重組腺病毒載體與包裝輔助質粒共轉染哺乳細胞，制備重組腺病毒；(3)采用重組腺病毒感染T細胞，得到COVID?19疫苗。本發明利用病毒系統構建表達SARS?CoV?2 S蛋白的重組T細胞，回輸入機體內持續性表達S蛋白，誘導機體產生特異性體液免疫反應或細胞免疫反應，使機體獲得對SARS?CoV?2的保護性免疫能力。

技術領域

本發明屬于細胞免疫治療技術領域，涉及一種COVID-19疫苗及其制備方法和應用。

背景技術

2019新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)引起的新冠肺炎(COVID-19)傳染性極強，國內外科研工作者正在緊鑼密鼓地進行疫苗研發。研究發現，SARS-CoV-2在人體內的感染途徑與SARS-CoV類似，病毒的棘突蛋白S蛋白(Spike protein)與血管緊張素轉化酶2(ACE2)相互作用，感染呼吸道上皮細胞。針對SARS，研究者嘗試了類病毒、蛋白亞單位等多種形式制備疫苗，并成功在動物實驗中誘導產生中和抗體，但是尚無任何針對SARS病毒的疫苗進入臨床階段。

冠狀病毒的S蛋白通過識別宿主細胞受體介導病毒和細胞膜的融合，在病毒感染中發揮重要作用，是病毒生命周期的關鍵，也是抗病毒藥物和疫苗的主要目標。SARS-CoV-2病毒的S蛋白是位于病毒外殼的I型病毒融合蛋白，由約1,300個氨基酸組成，可被水解為一個氨基(N)末端的S1亞基(約700個氨基酸)和一個羧基(C)末端的S2亞基(約600個氨基酸)。S1亞基是受體結合亞基，包含受體結合結構域(RBD)；S2亞基是融合亞基，包含疏水融合肽和兩個七肽重復區。冠狀病毒S蛋白具有兩個不同的蛋白酶切割位點。SARS-CoV的S蛋白的S1/S2裂解位點位于前體蛋白的殘基667之后，而S2'裂解位點在S2亞基上，位于其N端130個氨基酸處。

傳統疫苗多為滅活的死疫苗、減毒疫苗或重組亞單元疫苗，制備工藝存在諸多問題：(1)制備工藝復雜，需要使用細胞培養方法生產病毒，存在一定的安全性隱患；(2)質量控制和工藝放大要求高，控制不好會引發產品質量事故；(3)有效抗原量低，需要增加生產成本提高病毒滴度。

新型疫苗為含有抗原蛋白的編碼核酸或能激發特異性免疫應答的細胞疫苗，新型冠狀病毒疫苗的種類包括腺病毒載體疫苗、mRNA疫苗、DNA疫苗和重組蛋白疫苗等。截止目前，COVID-19的生物特性還不甚明顯，傳染性很強，活疫苗缺乏安全性且制備較困難，滅活疫苗存在與野毒株重組而恢復的風險。相比之下，基于基因工程制備的能激發特異性免疫應答的細胞疫苗具有更強的安全性、實用性以及可操作性。

發明內容

針對現有技術的不足和實際需求，本發明提供了一種COVID-19疫苗及其制備方法和應用，利用基因工程載體將病毒抗原基因導入T細胞，使T細胞持續表達病毒抗原，回輸機體后引發機體針對抗原的特異性體液或細胞免疫反應，產生中和抗體或特異性T細胞，使機體獲得針對該病毒的保護性免疫能力。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供了一種COVID-19疫苗，所述COVID-19疫苗包括表達SARS-CoV-2S蛋白的T細胞。

本發明中，采用基因工程的方法構建表達SARS-CoV-2S蛋白的重組T細胞，所述重組T細胞持續性表達抗原S蛋白，誘導機體產生特異性體液免疫反應或細胞免疫反應，相較于病毒型疫苗，安全性更高。

優選地，所述S蛋白包括SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；

SEQ ID NO:1：