[發明專利]一種用于瘦素免疫調節的口服重組酵母菌株

在審

• 申請號: 202011262351.1
• 申請日: 2020-11-12
• 公開（公告）號: CN112370525A
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發明（設計）人: 張智英;岳峰;徐坤;韓寶泉;王如玉;張瀟筠;李曉玉;姚長長
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: A61K38/22
• 分類號: A61K38/22;A61K9/00;A61K47/46;C12N1/19;A61P3/04;A61P3/06;A61P1/16;C12R1/865
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 范巍

本發明公開了一種用于瘦素免疫調節的口服重組酵母菌株，以酵母菌株作為宿主細胞，宿主細胞中轉染有ob基因重組表達載體，通過向哺乳動物腸道DC細胞靶向遞送ob基因重組表達載體，在DC細胞中表達出相應的重組瘦素蛋白，重組瘦素蛋白通過DC細胞呈遞，使黏膜免疫系統產生瘦素抗體，并通過免疫反應降低血液中的瘦素水平，實現對機體高瘦素導致的瘦素不敏感的肥胖的治療。

技術領域

本發明屬于免疫學和蛋白調節技術領域，涉及一種口服重組酵母菌株及其靶向腸道DC遞送ob基因DNA的應用。

背景技術

肥胖基因又稱ob基因，ob基因的表達產物稱為瘦素(leptin)，主要由脂肪組織合成和分泌，瘦素(leptin)的主要功能：控制能量代謝、抑制食欲、調節機體的免疫系統、骨的形成、肝臟組織代謝、調節生殖能力。

最初基于瘦素的肥胖癥藥物療法是根據脂平衡觀點開發的，即血液中循環瘦素水平的升高促進負能量平衡。最近一系列獨立的臨床研究結果表明，循環瘦素水平的部分降低(通過外周限制性CB1受體反向激動劑或減肥手術)可能導致體重下降。通過基因突變或藥物受體拮抗劑降低或消除瘦素受體活性可導致小鼠嚴重肥胖。通過瘦素中和抗體減少部分瘦素，可降低SOCS3的表達。此外，PTP1B對瘦素和胰島素信號通路均有抑制作用，促進肥胖和2型糖尿病的發生。因此，在肥胖的情況下，瘦素作用受損的主要原因可能不是瘦素信號本身的缺陷，而是瘦素信號的結構性激活誘導的有效反饋機制，它也反饋胰島素信號。部分減少瘦素在ARH中的作用改善了瘦素信號的反饋機制，恢復了瘦素和胰島素的敏感性。在低瘦素水平動物中，血液中循環瘦素水平降低，會產生體重增加、采食量增加的現象。

樹突狀細胞(Dendritic cells,DCs)是機體內功能最強的抗原呈遞細胞(Antigenpresenting cells,APC)，能夠高效地攝取、加工處理和呈遞抗原，處于調控和維持免疫應答的中心環節。釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)在制藥(疫苗)、畜牧(飼料添加劑)以及食品制造中廣泛使用，是國際上公認的可以食用的對機體無害的安全菌。和細菌相比，釀酒酵母可以有效的抵抗抗生素作用，同時還可以高效的存活于活體動物的胃腸道環境而不被降解，可用于進行大規模、低成本的口服疫苗生產。

中國專利201310647359.3公開了“一種口服重組酵母及其介導的靶向腸道DC呈遞shRNA的應用”，其通過基因工程酵母向活體動物腸道樹突狀細胞靶向遞送shRNA干擾載體，利用干擾RNA調節樹突狀細胞中目的基因的表達，通過降低樹突狀細胞CD40蛋白表達，可用于治療自身免疫病等疾病。但目前，尚未見到通過口服重組酵母，實現腸道DC呈遞瘦素相關抗原，并通過體液免疫調節瘦素蛋白水平的報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于瘦素免疫調節的口服重組酵母菌株，實現對機體高瘦素導致的瘦素不敏感的肥胖的治療。

為達到上述目的，本發明采用了以下技術方案：

一種口服重組酵母菌株，以酵母菌株作為宿主細胞，宿主細胞中轉染有ob基因重組表達載體。

優選的，所述重組表達載體選自JMB84-CMV-ob載體或JMB84-CMV-OVA-ob載體，JMB84-CMV-ob載體包括ob基因表達盒(具有CMV啟動子-ob基因序列-polyA的元件排列)；JMB84-CMV-OVA-ob載體包括OVA基因與ob基因的串聯表達盒(具有CMV啟動子-OVA基因序列-ob基因序列-polyA的元件排列)，CMV啟動子使重組表達載體能夠在哺乳動物細胞中表達出相應的蛋白，但在酵母菌中不表達，雞卵清白蛋白(OVA)用于增強重組表達載體在哺乳動物細胞中表達蛋白的免疫原性。

優選的，所述重組表達載體是通過酶切連接將ob基因序列克隆到載體JMB84-CMV-OMPG(參見SEQ.ID.NO.3)或JMB84-CMV-OVA-OMPG(參見SEQ.ID.NO.4)上，并替換OMPG(細菌外膜蛋白G)基因序列而得到的。