[發明專利]一種細胞凍存液

在審

• 申請號: 202011259342.7
• 申請日: 2020-11-12
• 公開（公告）號: CN112335648A
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 熊志軍;王慧;劉文
• 申請（專利權）人: 安徽惠恩生物科技股份有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 王依

本發明公開一種細胞凍存液，所述凍存液包含以下成分：基質、白蛋白、堿性成纖維細胞生長因子、異硫氰酸苯乙酯、DMSO，基質為DMEM/F12,基質、白蛋白、堿性成纖維細胞生長因子、異硫氰酸苯乙酯、DMSO按質量份比為：50～100份：20～30份：10～15份：1～5份：10～15份,細胞凍存液通過以下步驟配制而成：將基質、白蛋白進行混合，制得凍存液基質,將步驟一制備的凍存液基質加入堿性成纖維細胞生長因子、異硫氰酸苯乙酯、DMSO，制成細胞凍存液。本發明能夠防止凍存過程中的細胞損傷、保持細胞復蘇后的高活率及其功能，凍存液能夠降低細胞內的晶體形成，減少細胞內水凝固所形成的高濃度溶質對細胞造成的低溫損傷，提升細胞活率，制備方法簡單易操作，制備成本較低，易于產業化生產。

技術領域

本發明涉及一種細胞凍存技術領域，具體是一種細胞凍存液。

背景技術

細胞凍存是將細胞放在低溫環境，減少細胞代謝，以便長期儲存的一種技術，細胞凍存是細胞保存的主要方法之一，起到了細胞保種的作用，細胞凍存是細胞保存的主要方法之一，利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗，而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用，除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞，細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5％.15％的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷，采用慢凍快融的方法能較好地保證細胞存活，標準冷凍速度開始為-1到-2℃/min，當溫度低于-25℃時可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(-196℃)，現提出一種細胞凍存液，適合臨床使用、能夠提高免疫效應細胞活率和增殖水平以及副作用小。

發明內容

本發明的目的在于提供一種細胞凍存液，能夠防止凍存過程中的細胞損傷、保持細胞復蘇后的高活率及其功能，凍存液能夠降低細胞內的晶體形成，減少細胞內水凝固所形成的高濃度溶質對細胞造成的低溫損傷，提升細胞活率，凍存液的制備方法，方法簡單易操作，制備成本較低，易于產業化生產，避免了血清傳播動物源性病原體的風險。

本發明的目的可以通過以下技術方案實現：

一種細胞凍存液，所述凍存液包含以下成分：基質、白蛋白、堿性成纖維細胞生長因子、異硫氰酸苯乙酯、DMSO，基質為DMEM/F12,基質、白蛋白、堿性成纖維細胞生長因子、異硫氰酸苯乙酯、DMSO按質量份比為：50～100份：20～30 份：10～15份：1～5份：10～15份。

進一步地，所述細胞凍存液通過以下步驟配制而成：

步驟一：將基質、白蛋白進行混合，制得凍存液基質；

步驟二：將步驟一制備的凍存液基質加入堿性成纖維細胞生長因子、異硫氰酸苯乙酯、DMSO，制成細胞凍存液。

進一步地，所述細胞凍存液使用時，包括以下步驟：

S1:將需要凍存的細胞利用離心機1500rmp離心5min，離心結束后，去上清后，緩慢加入細胞凍存液，輕輕吹打混勻后，分裝；

S2：步驟一分裝的凍存液每管為1.5mL，放入-80℃冰箱中凍存8-24h后，次日移入液氮罐，凍存密度為1～10×10/mL。

S3：進行細胞復蘇，并進行存活細胞的測量，從液氮罐中取出凍存管，快速置于38℃水浴鍋中，輕輕震蕩凍存管，直至細胞懸液完全融化，對細胞存活數量進行檢測，存活數量在99％以上。

本發明的有益效果：

1、本發明細胞凍存液能夠防止凍存過程中的細胞損傷、保持細胞復蘇后的高活率及其功能；