[發明專利]一種天然PPARγ受體激動劑及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202011254537.2
• 申請日: 2020-11-11
• 公開（公告）號: CN112442103B
• 公開（公告）日: 2021-12-17
• 發明（設計）人: 何仰清;李佳慶;張丹;楊謙
• 申請（專利權）人: 西安理工大學
• 主分類號: C07J63/00
• 分類號: C07J63/00;A61P3/10
• 代理公司: 西安弘理專利事務所 61214
• 代理人: 曾慶喜

1.一種天然PPARγ受體激動劑熊果酸的制備方法，其特征在于，具體按照以下步驟實施：

步驟1：制備山茱萸提取物；制備過程如下：

步驟1.1：將山茱萸陰干粉碎之后，以75％的工業乙醇提取得總浸膏；

步驟1.2：將步驟1.1得到的浸膏充分分散到水里，用3倍體積的石油醚脫脂，得石油醚部位；

步驟1.3：將步驟1.2得到的萃余相加入3倍體積的乙酸乙酯萃取，旋干得到乙酸乙酯部位；

步驟2：將步驟1得到的山茱萸提取物進行分離純化得到受體激動劑；具體為：

步驟2.1：將步驟1.3得到的乙酸乙酯提取物溶解，加入200-300目的硅膠攪拌均勻混合，乙酸乙酯提取物和硅膠的質量比為1:1，待溶劑揮發完樣品干燥后，用研缽把樣品磨成粉末備用；

步驟2.2：在色譜柱依次加入不同濃度梯度的石油醚-乙酸乙酯及乙酸乙酯-甲醇進行梯度洗脫，每個濃度沖6L溶劑；

步驟2.3：將步驟2.2中各個濃度梯度的流出液用旋轉蒸發儀轉干；

步驟2.4：對步驟2.3中各個部分采用TLC薄層板點板，紫外燈，硫酸乙醇顯色情況，對分離得到的組分合并，最終合并為6個組分，標記為Fr.1：PE:EA＝80:20和60:40，27.7g、Fr.2：PE:EA＝40:60，2.2g、Fr.3：PE:EA＝20:80，135.7g、Fr.4：EA 100％，299.4g、Fr.5：EA:MeOH＝80:20，156.6g、Fr.6：EA:MeOH＝60:4，0→0:100，15.1g；

步驟2.5：將Fr.1和Fr.2合并后，以硅膠為固定相，采用梯度洗脫劑進行洗脫并收集，收集后使用旋轉蒸發儀轉干，分別收集并作好標記，將各個組分進行TLC點板，并在紫外燈下觀察點板結果，再使用硫酸乙醇或碘試劑顯色，根據TLC薄層色譜板顯示的比移值，將各所含化合物相近的組分進行合并，得到16個子組分：Fr.1-1、Fr.1-2、Fr.1-3、Fr.1-4、Fr.1-5、Fr.1-6、Fr.1-7、Fr.1-8、Fr.1-9、Fr.1-10、Fr.1-11、Fr.1-12、Fr.1-13、Fr.1-14、Fr.1-15、Fr.1-16；

步驟2.6：對Fr.1-6先應用反相高效液相色譜進行梯度洗脫分離，以含0.1％的甲酸的水和甲醇為洗脫劑，在40min內按此時間程序85:15→65:35，v/v，接著在20min內65:35→0:100、4mL/min設置的比例進行梯度洗脫，在保留時間為23.4min時收集到一個組分，將此組分進一步應用反相氨基柱色譜進行梯度洗脫分離：以含0.1％的甲酸的水和甲醇為洗脫劑，在40min內按此時間程序80:20→65:35，v/v，接著在20min內65:35→0:100、4mL/min得到化合物1，所述化合物1經核磁譜圖和質譜鑒定為熊果酸。

2.根據權利要求1所述的一種天然PPARγ受體激動劑熊果酸的制備方法，其特征在于，所述步驟2.2中石油醚與乙酸乙酯的體積比依次為80:20、60:40、40:60、20:80和100％的乙酸乙酯，所述乙酸乙酯和甲醇的體積比依次為80:20、60:40、40:60、20:80和100％的甲醇。