[發明專利]一種快速檢測食品中亞硝酸鹽的方法

有效

• 申請號: 202011251130.4
• 申請日: 2020-11-11
• 公開（公告）號: CN112345475B
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發明（設計）人: 楊德志;李秋蘭;陳子昭;楊亞玲
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/28;G01N1/34
• 代理公司: 昆明同聚專利代理有限公司 53214
• 代理人: 蘇蕓蕓

本發明公開了一種快速檢測食品中亞硝酸鹽的方法，本發明采用油酸包覆四氧化三鐵的擬過氧化酶特性，雙氧水存在下氧化3,3',5,5'?四甲基聯苯胺，亞硝酸鹽加速氧化反應進行，基于亞硝酸鹽濃度與氧化TMB藍色線性關系，建立高靈敏、選擇性強亞硝酸鹽檢測新方法，本方法檢出限為0.1μg/g；將本方法應用于食品中亞硝酸鹽的檢測分析，結果與GB 5009.33?2016食品安全國家標準食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定方法相符；方法具有靈敏度高、特異性強、操作簡單、快速等特點。

技術領域

本發明涉及化學分析檢測技術領域，具體為一種快速檢測食品中亞硝酸鹽的方法。

背景技術

硝酸鹽和亞硝酸鹽廣泛存在于人類環境中，是自然界中最普遍的含氮化合物。人體內硝酸鹽在微生物的作用下可還原為亞硝酸鹽，N-亞硝基化合物的前體物質。亞硝酸鹽來源于食物中作為發色劑和防腐劑的亞硝酸鹽，從食物中添加的硝酸鹽轉化而來，蔬菜，尤其是從不新鮮的蔬菜中轉化而來。亞硝酸鹽可與相關的化學物質生成致癌物質，國家也在不斷提高重視，對食品中亞硝酸鹽含量進行分析十分重要。目前，亞硝酸鹽和硝酸鹽的檢測方法主要有離子色譜法和分光光度法。食品中亞硝酸鹽的測定國家標準方法為鹽酸萘乙二胺分光光度法，原理是試樣經沉淀蛋白質、除去脂肪，在弱酸性條件下亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸重氮化后與鹽酸萘乙二胺偶合形成紫紅色染料，與標準比較以分光光度法定量。

納米酶是一類既有納米材料的獨特性能，又有催化功能的模擬酶。納米酶作為一類新型的模擬酶，它具有許多其他傳統模擬酶所無法企及的優點，人們可以根據納米材料模擬酶的特性進行研究并加以利用，讓納米酶具有更大的應用前景。四氧化三鐵具有過氧化氫納米模擬酶特性早已得到證實，但由于酶活低、納米粒子易團聚等缺陷使其應用受到限制。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種快速檢測食品中亞硝酸鹽的方法，這是擬過氧化酶結合亞硝酸鹽的加速氧化作用檢測亞硝酸鹽的方法，本發明采用油酸包覆四氧化三鐵擬過氧化酶特性，解決了四氧化三鐵納米粒子易團聚，同時過氧化酶活性高的特點，在雙氧水存在下，氧化3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB)，亞硝酸鹽存在加速氧化反應進行，基于亞硝酸鹽濃度與氧化TMB藍色線性關系，建立高靈敏、選擇性強亞硝酸鹽檢測新方法，檢出限為0.1 μg/g；實際應用中將對測定干擾的基體色素通過改性活性炭的吸附，有效提高了檢測靈敏度及重現性。本發明方法具有靈敏度高、特異性、操作簡單、快速等特點。

本發明快速檢測食品中亞硝酸鹽的方法，包括以下步驟：

（1）亞硝酸鹽工作曲線制作

在10mL具塞比色管中加入50~100μL油酸包覆四氧化三鐵、5mmol/L 3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB)0.2mL、20mmol/L的H₂O₂ 0.2mL、亞硝酸鹽標準溶液，用硫酸調pH為2，去離子水稀釋至刻度，搖勻，靜置5~10min，其中亞硝酸鹽在具塞比色管中的濃度在0.46~200μg/g范圍內，磁鐵分離油酸包覆四氧化三鐵，取上清液，在654nm波長處測定吸光度A，以亞硝酸鹽濃度為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪制標準曲線，得到回歸方程；

（2）樣品處理

香腸或腌肉樣品：將香腸或腌肉勻漿處理，從勻漿后的試樣中稱取5g（精確到0.001g）樣品，置于燒杯中，加12.5mL飽和硼砂溶液，攪拌均勻，加入150~200mL 65~75℃熱水，于沸水浴中加熱10~20min，最后加入質量濃度10%硫酸鋅溶液2.5mL，攪拌10min，離心，上清液過0.22 μm濾膜，用蒸餾水定容至250mL，得樣品液；

液體飲料樣品：取10.0mL的待測樣品置于燒杯中，加入5mL飽和硼砂溶液，攪拌均勻后引流至另一個燒杯中，用蒸餾水洗燒杯3~4次，加入5mL的220g/L乙酸鋅溶液，攪拌8~12min，離心，上清液過0.22μm濾膜，用蒸餾水定容至250mL，得樣品液；