[發(fā)明專利]抗人血清白蛋白單克隆抗體

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011247464.4
• 申請日: 2020-11-10
• 公開（公告）號: CN112480247B
• 公開（公告）日: 2023-09-22
• 發(fā)明（設計）人: 于在林;富巖;楊小楠;侯瓊;富俞淞;陳穎
• 申請（專利權）人: 華通福源生物技術（北京）股份有限公司;天津溥瀛生物技術有限公司;北京美福源生物醫(yī)藥科技有限公司;天津林達生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及經計算機分析人血清白蛋白成熟肽氨基酸序列，與鼠、牛、猴、羊、兔下去白蛋白成熟肽氨基酸序列比對，選擇出多個人血清白蛋白特異抗原決定簇氨基酸序列短肽，短肽氨基酸長度分別為15?35個。經人工合成短肽用于免疫小鼠，獲得可產生不與鼠、牛、猴、羊、兔有免疫反應的特異抗人血清白蛋白單克隆抗體的鼠雜交瘤細胞工程株。由細胞株制備的抗體對人血清白蛋白具有超高的靈敏度和超強的特異性。

技術領域

本發(fā)明屬于生物技術領域。本發(fā)明涉及經計算機分析人血清白蛋白成熟肽氨基酸序列，與鼠、牛、猴、羊、兔下去白蛋白成熟肽氨基酸序列比對，選擇出多個人血清白蛋白特異抗原決定簇氨基酸序列短肽，短肽氨基酸長度分別為15-35個。經人工合成短肽用于免疫小鼠，獲得可產生不與鼠、牛、猴、羊、兔有免疫反應的特異抗人血清白蛋白單克隆抗體的鼠雜交瘤細胞工程株。由細胞株制備的抗體對人血清白蛋白具有超高的靈敏度和超強的特異性。

背景技術

人血清白蛋白(HSA)是一種可溶性單體蛋白質，構成血液中蛋白總量的一半。白蛋白作為一種基本載體，攜帶傳遞脂肪酸、類固醇和激素分子等，其穩(wěn)定的惰性性質是維持血壓的一個重要因素。血清白蛋白是一種球狀非糖基化的、分子量為65千道爾頓、具有585個氨基酸的血清蛋白質。這一蛋白(白蛋白前體)再通過高爾基體的轉化加工，去除引導多肽，而分泌到細胞外。血清白蛋白有35個半胱氨酸，在血液中，白蛋白是一個有17個二硫鍵的單體(參見Brown?JR，“Albumin?structure,Function,and?Uses”Pergamon,N.Y.，1977)。當沒有分泌多肽時，在酵母細胞內的白蛋白產物是錯配狀態(tài)，將失去90％的抗原性(與血漿中自然狀態(tài)白蛋白相比)，并且形成不溶性的白蛋白聚合體，不具有白蛋白的生物活性。現(xiàn)在用于臨床的人血清白蛋白均是從人血漿中提取的。

白蛋白是血液中的主要成分，在人體內含量為每升血液含40-50克，其半衰期壽命為20天以上。在藥物制劑組成中，白蛋白也常被用作藥物的穩(wěn)定劑，尤其是生物藥和疫苗的制造。綜上所述，利用基因工程技術，將人血清白蛋白與治療性蛋白質基因融合在酵母菌或脊椎動物細胞中表達為重組融合蛋白后，該融合蛋白將具有極大的優(yōu)勢使之可抵御生物體內酶解作用，并可使治療性蛋白質在體內體外的壽命大大提高，也就是可增加治療性蛋白質在血清中和儲存時的穩(wěn)定性和較長的半衰期，達到蛋白藥物的長效化，大大減少給藥頻率,在重大疾病臨床治療中獲得更好的治療效果(于在林、富巖，更優(yōu)生物創(chuàng)新藥-重組人血清白蛋白融合蛋白，中國醫(yī)藥生物技術，2017,12(3):248-264)。

當人的尿液中檢測到微量白蛋白，反映出腎臟可能有異常滲漏蛋白質。尿微量白蛋白檢測指標可作為糖尿病、腎病疾病等慢性病的早期診斷指標，對尿液中白蛋白定量檢測，則具有重要的臨床意義。因此，建立特異、靈敏的檢測尿微量白蛋白的方法也具有重要的應用價值，而該方法的關鍵在于抗白蛋白單克隆抗體的靈敏度和特異性，即人血清白蛋白單克隆抗體，對抗原白蛋白檢測靈敏度和特異性的高低，在臨床上考察患者是否潛在患有糖尿病、腎病等慢性病的癥狀，這對于及早發(fā)現(xiàn)病情，及早治療具有重要的臨床意義。

另一方面，鑒于血源人血清白蛋白采血采漿都遇到顯著困難，而人白蛋白在臨床上，又是治療休克、燒傷、創(chuàng)傷、低蛋白血癥、急性血容量減少、癌癥化療、腹水、癌癥晚期及提高老齡人的機體免疫力等多種臨床適應癥的治療藥物。因此，利用微生物、植物，特別是畢赤酵母工程菌生產重組表達人血清白蛋白(rHSA)已成為血源HSA的升級換代在研產品。于在林、富巖中國授權專利ZL2004010057313.7和ZL2008中公開重組人血清白蛋白的表達工程菌的構建、生產工藝和純化工藝。但重組人血清白蛋白的純度要求更為嚴格。利用抗體/抗原具有特異性識別的特點而開展抗體親和層析分離純化，可進一步將重組人血清白蛋白的純度大大提高(大大降低宿主蛋白殘留量)，純化效率也會更高，這對于臨床患者用藥的安全性和經濟性將具有非常重要的價值。