[發明專利]一種利用牛膽汁高效酶提取膽汁酸的方法

在審

• 申請號: 202011242296.X
• 申請日: 2020-11-09
• 公開（公告）號: CN112322684A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發明（設計）人: 李康樂;沈濤;杜新園;程偉
• 申請（專利權）人: 湖南夏盛酶技術有限公司
• 主分類號: C12P33/00
• 分類號: C12P33/00;C07J9/00
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

本發明公開了一種利用牛膽汁高效酶提取膽汁酸的方法。屬于動物膽汁有效萃取技術領域。包括以下步驟：將原料、復合酶制劑混合，調節pH、酶解并攪拌調節后，固液分離得提取液；滅酶，加入膽鹽水解酶酶解，再調節pH并升溫，攪拌皂化，離心，并調節pH值，得上清液；加入雙氧水，攪拌混合均勻后，室溫下反應完畢后，過濾得處理液；緩慢加入醋酸丁酯并攪拌，然后調節溶液pH，固液分離，得到固形物；離心，水洗，再干燥至水分不高于1％，即得膽汁酸提取物成品。本發明采用酶制劑進行提取，提高產品純度，降低雜質，提高產品收率，從根本上避免有毒物質參與而帶來的污染，降低強酸強堿帶來的環境污染問題，而且工藝簡單、投資少、成本低。

技術領域

本發明涉及動物膽汁有效萃取技術領域，更具體的說是涉及一種利用牛膽汁高效酶提取膽汁酸的方法。

背景技術

牛膽汁為牛科動物黃牛或水牛的膽汁，鮮膽汁色澤呈綠褐色或暗褐色微透明，略粘、腥臭、味苦等特點，是提取CA和DCA的主要原料之一。膽汁是一種多種成分的混合物，除有大量水份外，主要含有膽汁酸、膽色素、膽固醇、脂肪酸、卵磷脂、常量和微量元素以及維生素、氨基酸、無機鹽離子等，與體液類似；此外，也含尿素、嘌呤等代謝產物和甲狀腺素、性激素、免疫蛋白等。膽汁酸在膽汁中的含量占到50％～60％，是膽汁的主要成分之一。膽汁酸是膽汁中存在的一類膽烷酸的總稱。膽汁酸根據結構的不同可分為游離膽汁酸和結合膽汁酸，游離膽汁酸包括膽酸(CA)、去氧膽酸(DCA)、鵝去氧膽酸(CDCA)和石膽酸(LCA)；結合膽汁酸是上述膽汁酸分別與甘氨酸和牛磺酸相結合的產物，主要包括甘氨膽酸(GCA)、牛磺膽酸(TCA)、甘氨鵝去氧膽酸(GCDCA)和牛磺鵝去氧膽酸(TCDCA)。

在動物體內90％以上的膽汁酸以結合形式存在，結合型膽汁酸是通過肽鍵與甘氨酸、牛磺酸結合而形成，如甘氨膽汁酸和牛磺膽汁酸，而牛磺膽汁酸是動物膽汁較為多見的膽汁酸，但是，在動物膽汁中游離型的膽汁酸含量極少或基本沒有。

牛膽汁在我國的應用已經歷史悠久，據《本草綱目》記載，牛膽汁具有清肝明目、利膽通腸、解毒消腫等功能。CA是合成人工牛黃的主要原料，也是作為牛黃臨床效用的主要物質。而由于天然牛黃主要來源與牛膽汁，且現代醫學研究已經證明牛黃具有鎮靜、抗驚厥、利膽和消炎等作用。

目前，國內外一般從牛、羊、豬的膽汁中分離提取，主要有以下三種提取方法：乙醇結晶法、氯仿法、醋酸乙酯分離法；氯仿法、乙醇結晶法、醋酸乙酯分離法，但是，上述方法均有有毒物質(氯仿、醋酸乙酯)參與，并且為了降低雜質需用乙醇、強堿或強酸等致蛋白質變性，脂肪酸皂化等，試劑消耗量大、成本較高、收率低，純度低，雜質含量仍然較高。

如果采用微生物處理，由于膽汁酸在動物體內屬于腸肝循環的原料，提取動物回腸及大腸內容物來培養提取其中的微生物，來水解結合型膽汁酸為游離型膽汁酸，不適合工業化生產，導致工藝繁瑣，成本增加。

因此，如何提供一種利用牛膽汁高效提取膽汁酸的方法是本領域技術人員亟需解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種利用牛膽汁高效酶提取膽汁酸的方法。操作簡便、條件溫和、試劑消耗量較低，從牛膽汁中提取高純度膽汁酸且收率高，適合大批量工業化生產。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種利用牛膽汁高效酶提取膽汁酸的方法，包括以下步驟：

(1)將原料、復合酶制劑混合，調節pH、酶解并攪拌調節后，固液分離得提取液；

(2)對提取液滅酶，加入膽鹽水解酶酶解，再調節pH并升溫，攪拌皂化，離心，并調節pH值，得上清液；

(3)將上清液加入雙氧水，攪拌混合均勻后，室溫下反應完畢后，過濾得處理液；

(4)向處理液中緩慢加入醋酸丁酯并攪拌，然后調節溶液pH，固液分離，得到固形物；