[發(fā)明專(zhuān)利]一種斑馬魚(yú)缺血性腦卒中模型、構(gòu)建方法及用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011240787.0
• 申請(qǐng)日: 2020-11-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112243898B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹子崗;樂(lè)青
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 井岡山大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A01K61/10
• 分類(lèi)號(hào): A01K61/10
• 代理公司: 西安銘澤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61223
• 代理人: 崔瑞迎

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種斑馬魚(yú)缺血性腦卒中模型、構(gòu)建方法及用途。在發(fā)育正常的成年斑馬魚(yú)頭部注射濃度0.01?0.05μg/ml的β?淀粉樣蛋白液，注射量為1μL/kg體重，注射后置于生理鹽水中20?40min，然后將斑馬魚(yú)轉(zhuǎn)移至含誘導(dǎo)劑的飼養(yǎng)液中飼養(yǎng)4?7d；所述誘導(dǎo)劑為可溶性鑭化合物或者可溶性鉛化合物。本發(fā)明成功構(gòu)建了小腦梗阻的缺血性腦卒中模型，為與認(rèn)知功能神經(jīng)損傷相關(guān)藥物的研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種斑馬魚(yú)缺血性腦卒中模型、構(gòu)建方法及用途。

背景技術(shù)

腦卒中是指向大腦輸送血液的血管疾病，缺血性腦卒中顧名思義就是局部腦組織血液供應(yīng)障礙，導(dǎo)致大腦神經(jīng)功能受損或缺失。腦卒中發(fā)生后可能存在影響生命活動(dòng)和運(yùn)動(dòng)功能障礙的嚴(yán)重后果，導(dǎo)致人體生活無(wú)法自理，因此是醫(yī)學(xué)界關(guān)注的難題。腦卒中可能發(fā)生在人腦不同區(qū)域，則會(huì)導(dǎo)致不同生理功能受損，目前臨床上治療腦卒中的藥物種類(lèi)非常有限，比如丁苯酞等，雖然具有一定臨床療效，但是也存在肝毒性和腎毒性的副作用，且不能針對(duì)特定腦區(qū)域修復(fù)。由于腦卒中恢復(fù)慢、致殘率高，如果能開(kāi)發(fā)出更多的神經(jīng)修復(fù)藥物，或者針對(duì)某個(gè)特定腦區(qū)域的神經(jīng)修復(fù)藥物，則腦卒中的治療效率將大大提高。

現(xiàn)有技術(shù)在研究藥物療效時(shí)，通常會(huì)構(gòu)建各類(lèi)動(dòng)物模型，如小鼠、大鼠、家兔、猴、斑馬魚(yú)等腦卒中模型，這些動(dòng)物易于飼養(yǎng)、來(lái)源廣泛，可以進(jìn)行藥物毒理和病理研究。中國(guó)專(zhuān)利CN108739556A公開(kāi)了一種光化學(xué)誘導(dǎo)斑馬魚(yú)缺血性腦卒中模型的構(gòu)建方法，其在斑馬魚(yú)腹部注射玫瑰紅溶液后將其轉(zhuǎn)移中含三卡因氨基苯加酸乙酯甲基磺酸鹽中，最后將頭部視頂蓋區(qū)暴露在光源下照射，光照后誘導(dǎo)恢復(fù)24h，最終得到缺血性腦卒中模型。經(jīng)過(guò)其進(jìn)一步研究，發(fā)現(xiàn)該方法主要是造成腦組織的端腦部位出現(xiàn)松散且梗死現(xiàn)象。但是腦組織還包括小腦等部位，端腦主要與斑馬魚(yú)的運(yùn)動(dòng)行為相關(guān)，而小腦主要與認(rèn)知功能相關(guān)。人的腦卒中可能發(fā)生在小腦、大腦等不同部位，當(dāng)需要開(kāi)發(fā)與認(rèn)知功能神經(jīng)損傷相關(guān)藥物時(shí)，就需要構(gòu)建出小腦部位的腦卒中模型。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種斑馬魚(yú)缺血性腦卒中模型的構(gòu)建方法。

本發(fā)明的目的是提供一種斑馬魚(yú)缺血性腦卒中模型的構(gòu)建方法，在發(fā)育正常的成年斑馬魚(yú)頭部注射濃度0.01-0.05μg/ml的β-淀粉樣蛋白液，注射量為1μL/kg體重，注射后置于生理鹽水中20-40min，然后將斑馬魚(yú)轉(zhuǎn)移至含誘導(dǎo)劑的飼養(yǎng)液中飼養(yǎng)4-7d；

所述誘導(dǎo)劑為可溶性鑭化合物或者可溶性鉛化合物。

優(yōu)選的，上述斑馬魚(yú)缺血性腦卒中模型的構(gòu)建方法，所述可溶性鑭化合物為硝酸鑭或者氯化鑭。

優(yōu)選的，上述斑馬魚(yú)缺血性腦卒中模型的構(gòu)建方法，所述可溶性鉛化合物為硝酸鉛或者醋酸鉛。

優(yōu)選的，上述斑馬魚(yú)缺血性腦卒中模型的構(gòu)建方法，飼養(yǎng)液中誘導(dǎo)劑的濃度為0.5-2mg/100ml。

優(yōu)選的，上述斑馬魚(yú)缺血性腦卒中模型的構(gòu)建方法，飼養(yǎng)液中飼養(yǎng)0-2d的誘導(dǎo)劑濃度為0.5-1mg/100ml，2d以后的誘導(dǎo)劑濃度為1.5-2mg/100ml。

優(yōu)選的，上述斑馬魚(yú)缺血性腦卒中模型的構(gòu)建方法，所述飼養(yǎng)液為添加了魚(yú)飼料的自來(lái)水。

優(yōu)選的，上述斑馬魚(yú)缺血性腦卒中模型的構(gòu)建方法，所述成年斑馬魚(yú)為AB或者TU品系野生型成年斑馬魚(yú)。

優(yōu)選的，上述斑馬魚(yú)缺血性腦卒中模型的構(gòu)建方法，生理鹽水和飼養(yǎng)液的溫度相同，且均為22-28℃。

本發(fā)明還提供了一種由上述任一中所述的方法構(gòu)建的斑馬魚(yú)缺血性腦卒中模型。

本發(fā)明還提供了一種上述所述的誘導(dǎo)劑在構(gòu)建動(dòng)物缺血性腦卒中模型中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：