[發明專利]一種高效純化分離抗體的方法

在審

• 申請號: 202011207446.3
• 申請日: 2020-11-03
• 公開（公告）號: CN112300272A
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 李智;諸葛鑫;劉金濤
• 申請（專利權）人: 李智
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K1/16;B01D15/38;D01F6/60;D06M11/79;D06M13/513;D06M101/34
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 王熙文

本發明公開了一種高效純化分離抗體的方法：制備異形纖維；將異形纖維進行分散制得分散液并轉移至反應器內，滴加硅源、正丁醇以及稀鹽酸的混合液，攪拌水解處理，繼續加入3?縮水甘油基氧基丙基三甲氧基硅烷、無水乙醇，氮氣氣氛下繼續攪拌反應，反應后過濾、干燥制得改性異形纖維填料；將改性異形纖維填料分散在去離子水中制得懸浮液，將懸浮液轉移至層析柱內，干燥，制得改性層析柱；采用緩沖溶液對改性層析柱進行平衡預處理，將待純化抗體溶液加載到層析柱內，采用緩沖溶液對層析柱進行洗滌，采用洗脫液對洗滌后的層析柱進行洗脫，并收集洗脫液；洗脫后的層析柱進行后處理再重復利用。該方法操作簡單，成本低，得到的抗體純度高。

技術領域：

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種高效純化分離抗體的方法。

背景技術：

抗體是一種由漿細胞在抗原的刺激下分泌的并能與抗原特異性結合的免疫球蛋白。抗體分為五類:IgG、IgM、IgA、IgD和IgE，其中IgG含量最高，是免疫的主要抗體。每一種相對應的抗原和抗體都會因為它們之間特定的親和力而結合，正是這種抗體-抗原的特異性結合的機理為抗體在生物技術領域和醫學領域的廣泛應用提供了基礎。隨著自然環境的惡化，人們生活習慣的改變和人口的老齡化，腫瘤的發病率和死亡率不斷上升，腫瘤已經成為威脅人們生命的主要惡性疾病[4]。抗體藥物具有比較低的毒副作用，同時具有比較強的靶向性和較高的特異性，在治療腫瘤領域越來越受到人們的青睞。

用于醫療目的的抗體必須具有較高的純度，使抗體的純化成本大大增加，現應用最廣泛的蛋白純化分離技術是親和層析法。親和層析法是利用生物活性物質之間的特異性親和力，以達到分離純化目標產物目的的蛋白純化方法。專利CN201811332123.X公開了一種蛋白A親和層析法純化抗體的方法以及抗體的純化方法。蛋白A親和層析法純化抗體的方法：循環利用以下蛋白A親和層析柱純化目標抗體：填料為MabSelect LX、Amsphere A3或Praesto Jetted A50，柱高為5～15cm，線性流速為200～500cm/h；在用洗脫液洗脫目標抗體之前，先用pH值為5～6，電導率為20～100mS/cm的緩沖液洗滌柱床。專利CN201811226606.1提供了一種抗體的純化方法、抗體和應用，涉及蛋白純化的技術領域。該純化方法包括：提供含有抗體粗品的細胞發酵液；提供用于層析的緩沖液；然后使用AKTAAvant 150對抗體粗品進行組合層析；其中組合層析依次包括(a)親和層析以捕獲抗體；(b)凝膠過濾層析置換Buffer以脫鹽；(c)再次層析分離抗體以對抗體進行精純處理。由上述現有技術可知，采用蛋白親和層析法來純化抗體，雖然可以得到高純度的抗體，但是成本較大，且吸附填料的重復利用性較低。

發明內容：

本發明要解決的技術問題是，針對現有技術的不足，提供一種高效純化分離抗體的方法。本發明首先采用制備高比表面積的異形纖維，然后在其表面涂覆二氧化硅涂層，來改善其機械性能和吸附性能，最后在二氧化硅涂層表面進行官能化處理，來提高材料與抗體的結合性能，從而達到對抗體純化的目的。該方法操作簡單，成本低，得到的抗體純度高。

為解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案：

一種高效純化分離抗體的方法，包括以下步驟：

(1)將聚酰胺切片并由雙螺桿擠出造粒，將制得的粒料經由紡絲機上的星型噴絲板擠出紡絲，制得異形纖維；

(2)將上述制得的異形纖維進行分散制得質量濃度為5-8％的分散液，將分散液轉移至反應器內，滴加硅源、正丁醇以及稀鹽酸的混合液，攪拌水解處理，繼續加入3-縮水甘油基氧基丙基三甲氧基硅烷、無水乙醇，氮氣氣氛下繼續攪拌反應，反應結束后，過濾，將過濾得到的沉淀干燥制得改性異形纖維填料；

(3)將上述制得的改性異形纖維填料分散在去離子水中制得質量濃度為0.15-0.25％的懸浮液，然后將懸浮液轉移至層析柱內，然后干燥，制得改性異形纖維柱；