[發明專利]一種精確調控重組蛋白表達的方法

在審

• 申請號: 202011202574.9
• 申請日: 2020-11-02
• 公開（公告）號: CN112301047A
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 田敬東;龔輝;呂永維;顧小雨
• 申請（專利權）人: 江蘇東玄基因科技有限公司
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C07K14/00
• 代理公司: 江蘇昆成律師事務所 32281
• 代理人: 劉尚軻

1.一種精確調控重組蛋白表達的方法，其特征在于：其包括以下步驟：

1)cNDA庫設計：根據設定規則設計編碼目標蛋白的多條cDNA序列，同時合成設計的所有cDNA序列，形成cDNA庫；

2)cNDA庫表達：然后將cDNA庫克隆到適宜的表達載體中，在指定的表達宿主或表達體系中表達；

3)表達篩選：根據所表達蛋白的特性或使用其它物理、化學或生物的方法對克隆進行篩選；

4)克隆驗證：最終挑選出最大限度滿足蛋白表達需要的克隆。

2.如權利要求1所述的精確調控重組蛋白表達的方法，其特征在于：所述cNDA庫設計包括：

11)根據對蛋白表達量和可溶性的設定要求，選擇使用頻率在設定區間的密碼子，而不是單純選擇使用頻率最高的密碼子；

12)根據對蛋白表達量和可溶性的設定要求，選擇設定GC％含量的密碼子；

13)根據對蛋白表達量和可溶性的設定要求，在蛋白序列的設定區域內通過選擇不同GC％含量的密碼子，控制該區域的平均GC％含量；

14)通過選擇不同的密碼子，減少DNA二級結構；

15)通過選擇不同的密碼子，減少DNA重復序列；

16)通過選擇不同的密碼子，刪除不需要的DNA序列；

17)經過上述選擇后得到cDNA庫。

3.如權利要求1所述的精確調控重組蛋白表達的方法，其特征在于：所述表達篩選包括以下步驟：

31)表達蛋白；

32)提取蛋白；

33)通過蛋白的物理、化學或生物特性進行篩選。

4.如權利要求1所述的精確調控重組蛋白表達的方法，其特征在于：所述步驟33)中所使用的方法包括

331)使用所表達蛋白或酶本身的物化特性或生物活性進行篩選；

332)使用共表達的融合標記蛋白，其包括熒光蛋白、顯色蛋白、親和力標記；或采用酶標儀、質譜儀、自動圖像識別處理裝置進行自動篩選。

5.如權利要求1所述的精確調控重組蛋白表達的方法，其特征在于：所述步驟1中在設計編碼目標蛋白的多條cDNA序列時，加大所指定的表達宿主或表達體系所偏好的密碼子使用頻率。

6.如權利要求1所述的精確調控重組蛋白表達的方法，其特征在于：所述步驟1中在設計編碼目標蛋白的多條cDNA序列時，減小各cDNA序列間的相似度。

7.如權利要求1所述的精確調控重組蛋白表達的方法，其特征在于：所述步驟1中在設計編碼目標蛋白的多條cDNA序列時，減少各cDNA序列中的二維結構。

8.如權利要求1所述的精確調控重組蛋白表達的方法，其特征在于：所設計合成的編碼目標蛋白的cDNA庫包含的序列數大于或等于100。