[發明專利]溫郁金脫毒苗培養方法

在審

• 申請號: 202011197020.4
• 申請日: 2020-10-31
• 公開（公告）號: CN112273232A
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: 石麗敏;宋費玲;盧華兵;許巧賢;朱正梅;呂學高;陳一波;吳志剛;姜武;陶正明
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

本發明公開了一種溫郁金脫毒苗培養方法，包括以下步驟：選取溫郁金的主根莖進行催芽，直至在主根莖上獲得健壯芽；割取健壯芽后進行清洗，剝去外層芽鞘，挑取生長點接入誘導萌發分化培養基中進行培養；所得的脫毒幼苗轉接于增殖培養基上進行增殖培養和重復培養；培養所得的單株小苗轉移到生根壯苗培養基上進行培養，直至獲得可出瓶種植的種苗。采用本發明的方法可以在相對較短周期內生產大量遺傳背景相同、長勢一致的優質種苗，尤其適用于溫郁金脫毒苗工廠化育苗。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種溫郁金脫毒苗的培養方法。

背景技術

溫郁金(Curcuma wenyujin Y.H.Chen et C.Ling)是姜科姜黃屬植物，是浙江省著名道地藥材，是傳統“浙八味”之一，為中國藥典多版收載品種，根莖干燥后為溫莪術，藥用功能非常廣泛。藥理研究顯示，其具有抗炎、鎮痛、抗腫瘤、抗早孕、抗菌、升高白細胞、保肝、抑制血小板聚集和抗血栓形成的功效，臨床用于治療癥瘕痞塊、瘀血經閉、食積脹痛、早期宮頸癌等癥，對心血管、胃腸平滑肌和急性腎功能衰竭等也發揮一系列藥理作用。目前，溫郁金作為一種抗腫瘤、抗病毒、抗炎的重要藥材，臨床用量和工業化生產用量十分巨大，市場上已經出現了供不應求的狀況。

隨著我國傳統道地藥材GAP的廣泛深入實施，生產、加工、制藥、銷售對植物藥材品質要求更加嚴格，遺傳純合的高產、優質新品種是保證質量穩定的重要物質基礎。但是實際生產上溫郁金主要以根莖留種繁殖，病毒化嚴重，嚴重影響產量和品質，難以得到安全、有效、穩定、可控的溫莪術藥材，再加上溫郁金的生育期長，用種量大，難以適應標準化和規模化生產的要求，已經嚴重影響到種植戶的積極性和總產量。

《溫郁金脫毒組織培養技術研究》告知了以下方案：為了建立溫郁金脫毒組培苗的快繁體系，以溫郁金主根莖為材料，采用高溫預處理催芽結合莖尖培養技術獲得脫毒苗。結果表明：莖尖培養的最適培養基為MS+6-BA2.0mg/L十NAA0.5 mg/L+蔗糖3％+瓊脂5.0g/L；不定芽增殖培養基為MS+6-BA3.0mg/L+蔗糖3％+瓊脂5.0g/L；脫毒苗生根誘導最適培養基為MS十6-BA l.5mg/L十NAA2.0 mg/L十蔗糖3％十瓊脂5.0g/L，用超薄電鏡切片法和RT-PCR法檢測病毒率，該莖尖再生苗脫毒率達78.6％。試管苗移栽后植株的成活率達90％以上，植物生長健壯，抗性增強，為溫郁金種苗進一步工廠化快速繁殖提供了重要參考價值。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種溫郁金莖尖脫毒苗的培養方法，采用本發明的方法可以快速簡便地獲得大量溫郁金脫毒苗。

為了解決上述問題，本發明提供一種溫郁金脫毒苗培養方法，依次包括以下步驟：

1)、取材：

選取溫郁金的主根莖(生長健壯的溫郁金主根莖)進行催芽，直至在主根莖上獲得長度為1±0.1cm的健壯芽；

割取健壯芽后進行清洗；

2)、種子的誘導萌發與分化：

將步驟1)所得的芽經消毒(常規消毒)后，剝去外層芽鞘，挑取0.5～1mm大小的生長點接入誘導萌發分化培養基中進行培養；直至得1.5～2cm高的脫毒幼苗；

培養條件為：

每天14小時光照，光照強度30～40μmol m^-2·s^-1，溫度為26±1℃；10小時暗培養，溫度為21±1℃；上述光照和暗培養交替進行；

3.1)、幼苗的增殖：

將步驟2)所得的脫毒幼苗轉接于增殖培養基上進行增殖培養，培養條件為：16小時光照，光照強度30～40μmolm^-2s^-1，溫度為26±1℃；8小時暗培養，溫度為21±1℃；上述光照和暗培養交替進行；