[發(fā)明專利]基因內(nèi)microRNA miR-483-3p在誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡中的應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202011191790.8
• 申請日: 2020-10-30
• 公開（公告）號: CN112280738A
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周小明;王哲;殷憲倫
• 申請（專利權(quán)）人: 山東第一醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院（山東省立醫(yī)院）
• 主分類號: C12N5/0786
• 分類號: C12N5/0786
• 代理公司: 濟(jì)南誠智商標(biāo)專利事務(wù)所有限公司 37105
• 代理人: 房一粟

本發(fā)明公開了基因內(nèi)microRNA miR?483?3p在誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡中的應(yīng)用，誘導(dǎo)miR?483?3p上調(diào)能通過抑制靶基因MED1，使其轉(zhuǎn)錄調(diào)控的下游促凋亡分子p53和p21表達(dá)升高，從而促進(jìn)巨噬細(xì)胞凋亡，同時，上調(diào)的主基因IGF2也能促進(jìn)巨噬細(xì)胞凋亡。這些研究有助于深入理解內(nèi)含子miRNA在ROS引起的巨噬細(xì)胞功能紊亂中的作用，揭示其在AS發(fā)生發(fā)展中的作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因內(nèi)microRNA miR-483-3p在誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡中的應(yīng)用，屬于基因工程領(lǐng)域。

背景技術(shù)

冠心病和腦卒中等心腦血管疾病是嚴(yán)重危害人類健康的“頭號殺手”，動脈粥樣硬化(AS)是這些疾病的關(guān)鍵病理基礎(chǔ)之一。AS的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，免疫炎在其中發(fā)揮關(guān)鍵作用。作為關(guān)鍵的免疫炎癥細(xì)胞，巨噬細(xì)胞從初期的脂質(zhì)條紋，到末期的斑塊破裂或糜爛，在AS發(fā)生發(fā)展的全過程都發(fā)揮核心作用。目前認(rèn)為巨噬細(xì)胞凋亡在AS病變早期是保護(hù)因素，能減輕早期動脈粥樣硬化的發(fā)展；而在AS病變晚期則加劇AS進(jìn)程，導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定，促使壞死核心形成，增加形成血栓的風(fēng)險。影響巨噬細(xì)胞凋亡的因素及其機(jī)制非常復(fù)雜包括各種環(huán)境信號、細(xì)胞因子、脂質(zhì)及其衍生物等，在AS發(fā)生發(fā)展過程中巨噬細(xì)胞凋亡的機(jī)制仍未完全闡明。因此，有必要對AS中巨噬細(xì)胞的凋亡機(jī)制開展更深入的研究。

活性氧類(ROS)是需氧細(xì)胞氧化呼吸代謝的產(chǎn)物，包括氧離子、過氧化物和含氧自由基等。生理濃度的ROS作為信號分子，在各種細(xì)胞功能調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用。如ROS能刺激破骨細(xì)胞活性，促使其分化。然而，過量ROS則引起氧化應(yīng)激，導(dǎo)致細(xì)胞功能異常，如細(xì)胞遷移、增殖和凋亡異常等，這也是包括AS在內(nèi)的多種心血管疾病的重要發(fā)病機(jī)制

內(nèi)含子miRNA是位于蛋白編碼基因(host gene)內(nèi)含子上的一類miRNA，一般與主基因受同一啟動子調(diào)控，表達(dá)模式一致，協(xié)同調(diào)控細(xì)胞功能。miR-483-3p是位于IGF2基因內(nèi)含2的典型內(nèi)含子miRNA，并被報道參與多種代謝性疾病和腫瘤的發(fā)生發(fā)展。如在鼠源3T3-L1細(xì)胞系中過表達(dá)miR-483-3p能通過限制脂肪細(xì)胞的脂質(zhì)存儲而引發(fā)脂毒性和胰島素抵抗；抑制miR-483-3p則能促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞歸巢。miR-483-3p在腎母細(xì)胞瘤、結(jié)腸癌、肝癌等中過表達(dá)，能抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤發(fā)生。但也有研究顯示miR-483-3p促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制增殖，從而抑制腫瘤發(fā)病。此外，miR-483-3p在人小梁網(wǎng)細(xì)胞中能抑制靶基因Smad4表達(dá)，從而對抗氧化應(yīng)激對細(xì)胞外基質(zhì)的上調(diào)。這些結(jié)果提示miR-483-3p的功能復(fù)雜，在不同種類的細(xì)胞和環(huán)境因素下的作用可能不同甚至相反。目前仍未有miR-483-3p在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡中作用和機(jī)制的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為解決上述內(nèi)容，提供基因內(nèi)microRNA miR-483-3p在誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡中的應(yīng)用，誘導(dǎo)miR-483-3p上調(diào)能通過抑制靶基因MED1，使其轉(zhuǎn)錄調(diào)控的下游促凋亡分子p53和p21表達(dá)升高，從而促進(jìn)巨噬細(xì)胞凋亡，同時，上調(diào)的主基因IGF2也能促進(jìn)巨噬細(xì)胞凋亡。

基因內(nèi)microRNA miR-483-3p在誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡中的應(yīng)用。

進(jìn)一步的，上述基因內(nèi)microRNA miR-483-3p的序列為SEQ ID NO.1。

基因內(nèi)microRNA miR-483-3p誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的方法，包括如下步驟：上調(diào)巨噬細(xì)胞內(nèi)基因內(nèi)microRNA miR-483-3p的表達(dá)，從而抑制其靶基因MED1表達(dá)，進(jìn)而上調(diào)MED1調(diào)控的p53/p21促進(jìn)ROS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡。

本申請還可以提供基因內(nèi)microRNA miR-483-3p在緩解高濃度H₂O₂引起的氧化應(yīng)激中的應(yīng)用。

進(jìn)一步的，上述應(yīng)用的應(yīng)用方法為：下調(diào)基因內(nèi)microRNA miR-483-3p在巨噬細(xì)胞中的表達(dá)。

有益效果：