[發(fā)明專利]用于檢測慢性淋巴細胞白血病耐藥相關(guān)基因突變的數(shù)字PCR試劑盒及引物和探針有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011186910.5 | 申請日： | 2020-10-30 |
| 公開（公告）號： | CN114438179B | 公開（公告）日： | 2023-06-13 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 繆祎;李建勇;顧丹靈;朱華淵;謝立群;肖曉;趙培培;劉以哲;熊慧 | 申請（專利權(quán)）人： | 江蘇省人民醫(yī)院（南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院）;蘇州云泰生物醫(yī)藥科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6858 | 分類號： | C12Q1/6858;C12Q1/6886;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京和信華成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11390 | 代理人： | 郝亮 |
| 地址： | 210029 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 檢測 慢性 淋巴細胞 白血病 耐藥 相關(guān) 基因突變 數(shù)字 pcr 試劑盒 引物 探針 | ||
1.一種用于檢測慢性淋巴細胞白血病耐藥相關(guān)基因突變的數(shù)字PCR試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中含有核酸擴增試劑，所述核酸擴增試劑中含有用于檢測BCL2?G101V和F104L位點、PLCG2?R655W位點、PLCG2?S707Y?位點、BTK?C481S位點的突變的引物和探針；
用于檢測BCL2?G101V和F104L位點的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示、下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示、探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:3~?SEQ?ID?NO:5所示，
用于檢測PLCG2?R655W位點的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:6所示、下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:7所示、探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:8~?SEQ?ID?NO:9所示，
用于檢測PLCG2?S707Y位點的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:10所示、下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:11所示、探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:12~?SEQ?ID?NO:13所示，
用于檢測BTK?C481S位點的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:14所示、下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:15所示、探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:16~?SEQ?ID?NO:17所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的數(shù)字PCR試劑盒，其特征在于，所述探針的?5’端連接有熒光基團，3’端連接有熒光淬滅基團；
所述SEQ?ID?NO:3、SEQ?ID?NO:5、SEQ?ID?NO:8、SEQ?ID?NO:12、SEQ?ID?NO:16的熒光基團為?FAM、熒光淬滅基團為MGB；所述SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:9、SEQ?ID?NO:13、SEQ?IDNO:17的熒光基團為VIC、熒光淬滅基團為MGB。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的數(shù)字PCR試劑盒，其特征在于，所述上游引物的濃度為0.35?μmol/L；所述下游引物的濃度為0.35?μmol/L；所述探針的濃度為0.18?μmol/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的數(shù)字PCR試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還含有陰性對照和陽性對照，所述陰性對照為工藝用水，所述陽性對照為含有SEQ?ID?NO:18~?SEQ?ID?NO:26所示的片段化質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的數(shù)字PCR試劑盒，其特征在于，所述試劑盒所適用的樣本選自血漿標(biāo)本或石蠟標(biāo)本。
6.一種采用數(shù)字PCR檢測慢性淋巴細胞白血病耐藥相關(guān)基因突變的引物和探針，其特征在于，所述引物和探針為用于檢測BCL2?G101V和F104L位點、PLCG2?R655W位點、PLCG2S707Y?位點、BTK?C481S位點的突變的引物和探針；
用于檢測BCL2?G101V和F104L位點的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示、下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示、探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:3~?SEQ?ID?NO:5所示，
用于檢測PLCG2?R655W位點的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:6所示、下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:7所示、探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:8~SEQ?ID?NO:9所示，
用于檢測PLCG2?S707Y位點的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:10所示、下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:11所示、探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:12~?SEQ?ID?NO:13所示，
用于檢測BTK?C481S位點的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:14所示、下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:15所示、探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:16~?SEQ?ID?NO:17所示；
所述SEQ?ID?NO:3、SEQ?ID?NO:5、SEQ?ID?NO:8、SEQ?ID?NO:12、SEQ?ID?NO:16的熒光基團為?FAM、熒光淬滅基團為MGB；所述SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:9、SEQ?ID?NO:13、SEQ?IDNO:17的熒光基團為VIC、熒光淬滅基團為MGB。
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