[發(fā)明專利]一種甲型、乙型流感病毒核酸檢測試劑盒及使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011186596.0
• 申請日: 2020-10-29
• 公開（公告）號: CN112176109A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發(fā)明（設計）人: 趙百慧;楊孫孝;李春明;向軍喜
• 申請（專利權）人: 上海伯杰醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686
• 代理公司: 上海樂泓專利代理事務所(普通合伙) 31385
• 代理人: 蘇杰

本發(fā)明的一種甲型、乙型流感病毒核酸檢測試劑盒，包括核酸擴增反應液、酶混合液、甲/乙型流感病毒混合反應液、陽性對照液、弱陽性對照液和陰性對照液，其中，甲/乙型流感病毒混合反應液包括甲型流感病毒上游引物、甲型流感病毒下游引物、甲型流感病毒探針、乙型流感病毒上游引物、乙型流感病毒下游引物、乙型流感病毒探針、內參RNase P上游引物、內參RNase P下游引物、內參RNase P探針和DEPC水，其中內參是對產品本身內參的檢測，本實施例的內參會參與核酸提取到RT?PCR的過程，可用于對樣本采集、保存和運輸以及核酸提取過程和擴增過程進行監(jiān)控，避免假陰性判讀結果的出現(xiàn)。

技術領域

本發(fā)明屬于流感病毒核酸檢測技術領域，具體來說是一種甲型、乙型流感病毒核酸檢測試劑盒及使用方法。

背景技術

流行性感冒是由流感病毒引起的一種急性呼吸道傳染病，春冬季節(jié)高發(fā)，傳播迅速，發(fā)病率高，流行期短，易引起暴發(fā)流行或大流行，控制難度較大。流感病毒包括甲、乙、丙三型，甲型最容易引起流行，乙型次之，丙型極少引起流行。流感病毒主要經(jīng)空氣飛沫傳播，常引起發(fā)熱、乏力、肌肉酸痛以及輕到中度的呼吸道癥狀，重者可致肺炎、心肌炎和心衰。由于這些病毒引起的感染癥狀和流行特點相似，僅靠臨床癥狀對病原進行區(qū)分非常不可靠，實驗室診斷方法有病毒分離、抗原檢測與核酸檢測等。

目前國內應用熒光PCR技術進行甲型流感病毒、乙型流感病毒核酸檢測的試劑盒主要為單重核酸檢測試劑盒及甲/乙流通用檢測試劑盒。這些試劑盒或是不能同時檢測甲型流感病毒和乙型流感病毒；或是無法區(qū)分甲型流感和乙型流感，且操作時間較長，操作繁瑣。而實際臨床使用及疾病預防控制系統(tǒng)在追蹤和分析病原體時常常要區(qū)分病原體種類和型別。

因此，亟需一種靈敏度高、特異性強、覆蓋面廣、操作簡便的甲型流感病毒、乙型流感病毒檢測方法。

發(fā)明內容

1.發(fā)明要解決的技術問題

本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有的甲型流感病毒、乙型流感病毒檢測不夠便捷且難以對結果準確性進行評估的問題。

2.技術方案

為達到上述目的，本發(fā)明提供的技術方案為：

本發(fā)明的一種甲型、乙型流感病毒核酸檢測試劑盒，包括核酸擴增反應液、酶混合液、甲/乙型流感病毒混合反應液、陽性對照液、弱陽性對照液和陰性對照液。

優(yōu)選的，所述甲/乙型流感病毒混合反應液包括甲型流感病毒上游引物、甲型流感病毒下游引物、甲型流感病毒探針、乙型流感病毒上游引物、乙型流感病毒下游引物、乙型流感病毒探針、內參RNase P上游引物、內參RNase P下游引物、內參RNase P探針和DEPC水。

優(yōu)選的，所述核酸擴增反應液包括核苷酸混合液、Buffer、MgCl₂溶液和DEPC水。

優(yōu)選的，所述酶混合液包括DNA聚合酶、逆轉錄酶、UNG酶、RNA酶抑制劑和稀釋液。

優(yōu)選的，所述陽性對照液包括甲型流感病毒病毒樣顆粒、乙型流感病毒病毒樣顆粒、RNase P病毒樣顆粒和TE緩沖液；所述弱陽性對照液為取1μL的陽性對照液與999μL的TE緩沖液混合制成；所述陰性對照為0.9％的氯化鈉溶液。

優(yōu)選的，所述甲型流感病毒上游引物、甲型流感病毒下游引物、甲型流感病毒探針、乙型流感病毒上游引物、乙型流感病毒下游引物、乙型流感病毒探針、內參RNase P上游引物、內參RNase P下游引物、內參RNase P探針。

優(yōu)選的，所述內參RNase P上游引物的序列為AGATTTGGACCTGCGAGCG，所述內參RNase P下游引物的序列為GAGCGGCTGTCTCCACAAGT，所述內參RNase P探針序列為TTCTGACCTGAAGGCTCTGCGCG。